Лабораторний практикум з основ мікробіології та імунології. Практикум з мікробіології

У циклі лабораторних та практично робіт з навчальної дисципліни «Основи мікробіології, санітарії та гігієни в харчовому виробництві» розглядається влаштування мікроскопів, основні методики, що застосовуються при мікробіологічних дослідженнях. За допомогою яких вивчаються морфологічні, біохімічні ознаки бактерій, проводиться санітарно-бактеріологічна оцінка об'єктів довкілляі харчових продуктів. Правила приготування дезінфікуючих розчинів та правила проведення санітарної обробки обладнання, інвентарю, посуду, тари. Запобіжні заходи виробничого травматизму, надання долікарської допомоги.

Завантажити:

Попередній перегляд:

ЛАБОРАТОРНІ ТА ПРАКТИЧНІ РОБОТИ

з дисципліни

ОСНОВИ МІКРОБІОЛОГІЇ, САНІТАРІЇ ТА ГІГІЄНИ У ХАРЧОВОМУ ВИРОБНИЦТВІ

Методичні вказівки для учнів

Професія ____260807.01 Кухар, кондитер__________

Тарасове 2015

Упорядник: Репенко З.В., викладач

Вступ
ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 1
ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 2 Найпростіші мікробіологічні дослідження
ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 3
ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 4
ПРАКТИЧНА РОБОТА №1
ПРАКТИЧНА РОБОТА Диференційований залік
Список літератури

Вступ

Навчальна дисципліна ОП.1Основи мікробіології, санітарії та гігієни у харчовому виробництвівходить до структури загальнопрофесійного циклу.

Кількість годин на освоєння програми навчальної дисципліни:

максимального навчального навантаження учня 51 годин, у тому числі:

обов'язкового аудиторного навчального навантаження учня 36 годин;

самостійної роботи учня 12:00;

консультації – 3 години.

У циклі лабораторних і практичних робіт необхідно розглянути пристрій мікроскопів, основні методики, що застосовуються при мікробіологічних дослідженнях. За допомогою яких вивчаються морфологічні, біохімічні ознаки бактерій, проводиться санітарно-бактеріологічна оцінка об'єктів довкілля та харчових продуктів. Правила пвиготовлення дезінфікуючих розчинів та санітарну обробку обладнання, інвентарю, посуду, тари. Заходи запобігання виробничому травматизму, надання долікарської допомоги.

Проведені лабораторні та практичні роботи дозволять учням закріпити знання, отримані на заняттях теоретичного курсу, та опанувати навички мікробіологічних досліджень та санітарної обробки обладнання, інвентарю, посуду.

Цілі та завдання навчальної дисципліни – вимоги до результатів освоєння дисципліни:

В результаті освоєння навчальної дисципліни ученьповинен вміти :

дотримуватись правил особистої гігієни та санітарних вимог при приготуванні їжі; проводити санітарну обробку обладнання та інвентарю;

готувати розчини дезінфікуючих та миючих засобів;

виконувати найпростіші мікробіологічні дослідження та оцінювати отримані результати.

Лабораторна робота №1(а)

Найпростіші мікробіологічні дослідження

Мета: вивчення правил роботи у мікробіологічних лабораторіях та загальних правил роботи з мікроскопом.

Тривалість заняття: 1 година

Обладнання: Мікроскопи.

Програма заняття:

1. Організація мікробіологічних лабораторій та правила роботи в них.

2. Мікроскопи та мікроскопічна техніка.

Вивчити правила роботи з мікроскопом.

Правила роботи у мікробіологічних лабораторіях

Працюючи в мікробіологічної лабораторії учень повинен суворо дотримуватися правил внутрішнього розпорядку.

1. Усі повинні працювати в халатах, шапочках та змінному взутті

2. У лабораторії забороняється курити та вживати їжу.

3. Робоче місце має утримуватися у зразковому порядку.

4. При випадковому попаданні заразного матеріалу на стіл, підлогу та ін. це місце необхідно ретельно обробити розчином, що дезінфікує.

5. Зберігання, спостереження за культурами мікроорганізмів та їх знищення повинні проводитись відповідно до спеціальної інструкції.

6. Після закінчення роботи руки слід ретельно вимити, а при необхідності обробити розчином, що дезінфікує.

Методичні вказівки:

Загальні правила роботи із мікроскопом. Робота з будь-яким мікроскопом складається з правильної установки освітленості поля зору та препарату та його мікроскопії різними об'єктивами. Висвітлення може бути природним (денним) або штучним, навіщо використовують спеціальні джерела світла. Місце для мікроскопа вибирають далі прямого сонячного світла. Робота на столі із темною поверхнею менше втомлює очі. Найкраще дивитися в окуляр лівим оком, не закриваючи правого.

Переносять мікроскоп, тримаючи однією рукою за штатив, іншою - за основу мікроскопа. Слід оберігати мікроскоп від поштовхів, зіткнення з сильнодіючими речовинами типу кислот, лугів. Не рекомендується виймати окуляр із труби, щоб не забруднювати пилом трубу та об'єктиви. Під час роботи бажано захищати мікроскоп від дихання, тому що конденсація парів веде до її псування.

Лінзи мають бути завжди чистими. Мікроскоп слід зберігати у чохлі. Не можна торкатися пальцями оптичних поверхонь.

При мікроскопії препаратів слід суворо дотримуватись певного порядку в роботі:

1) приготований та пофарбований мазок помістити на предметний столик (зміцнювати затискачами обов'язково);

2) встановити освітлення так, щоб у полі зору з'являється світле кільце діафрагми;

3) повернути револьвер до необхідного об'єктива (до клацання);

3) обережно опустити тубус мікроскопа до появи об'єктів дослідження;

4) провести остаточне фокусування препарату мікрометричним гвинтом, обертаючи його в межах лише одного обороту. Не можна допускати дотику об'єктиву з препаратом, оскільки це може спричинити поломку препарату чи фронтальної лінзи.

Після закінчення роботи мікроскоп протирається і забирається в чохол, предметне скло промивається і просушується.

Контрольні питання:

1. Чому так багато правил поведінки у мікробіологічних лабораторіях?
2. Як зберігається мікроскоп?
3. Розкажіть правила перенесення мікроскопа.

Лабораторна робота №1 (б)

Найпростіші мікробіологічні дослідження

Ціль: розгляд варіантів приготування препаратів.

Тривалість заняття: 1 година

Устаткування: Мікроскопи,

Програма заняття

1. Приготування препаратів на дослідження живих клітин.

2. Приготування фіксованих препаратів.

Завдання для виконання лабораторної роботи:

Вивчити техніку виготовлення препаратів.

Методика приготування препарату:

Пробірку з культурою тримають у лівій руці майже у горизонтальному положенні поблизу пальника. Обпаленої в полум'ї бактеріологічною голкою з пробірки беруть не велика кількістьмікробної маси. Перед взяттям культури правою рукою виймають ватяну пробку з пробірки, затискаючи її між мізинцем та долонею, а краї пробірки обпалюють на полум'ї пальника. Голку тримають у правій руці великим, вказівним та середнім пальцями.

Якщо культуру беруть із рідкого середовища, не слід сильно нахиляти пробірку, щоб не змочити її краї та пробку. Для взяття культури краще скористатися петлею. Після взяття культури краю пробірки та пробку обпалюють у полум'ї та закривають пробірку.

1. Дослідження живих клітин мікроорганізмів методами "розчавленої" та "висячої" краплі. Обидва методи застосовують для виявлення рухливості клітин мікроорганізмів, спостереження за розмноженням, утворенням та проростанням спор, встановлення реакції мікроорганізмів на хімічні сполукиі фізичні факторивпливу, вивчення розмірів клітин, характеру їх розташування та визначення запасних речовин клітини.

Препарати мікроскопують, трохи затемняючи поле зору; конденсор трохи опускають, надходження світла регулюють увігнутим дзеркалом. Спочатку користуються малим збільшенням – об'єктив 8х, після того як виявляють край краплі, встановлюють об'єктив 40х.

Метод "розчавленої" краплі. На чисте предметне скло наносять краплю водопровідної води. До неї вносять культуру та змішують із водою. Накривають краплю покривним склом так, щоб під ним не утворювались бульбашки повітря. Скляною паличкою притискають покривне скло до предметного та видаляють надлишок води фільтрувальним папером, підносячи її до країв покривного скла.

Метод "висячої" краплі. Застосовують для тривалих спостережень за клітинами мікроорганізмів. На стерильне покривне скло наносять голкою негусту суспензію мікроорганізмів, вирощених у рідкому живильному середовищі або підготовлених для цієї мети у фізіологічному розчині (0,5% розчин NaCl). Покривне скло перевертають і поміщають на предметне стерильне з лункою посередині так, щоб крапля вільно звисала над лункою. Для герметичності краю лунки змащують вазеліном.

1. Фіксовані препарати мікроорганізмів.У мікробіології часто готують фіксовані препарати. Їх розглядають під мікроскопом забарвленими. Під фіксацією мають на увазі таку обробку живого об'єкта, яка дає можливість швидко перервати перебіг життєвих процесів у ньому, зберігши тонку структуру. Внаслідок фіксації клітини міцно прикріплюються до скла і краще фарбуються. Фіксація необхідна для роботи з патогенними мікроорганізмами для безпеки.

Приготування мазка. На чисте знежирене предметне скло наносять краплю водопровідної води. Прожареною бактеріологічною голкою з пробірки з культурою беруть невелику кількість мікробної маси та вносять у краплю. Краплю ретельно розмазують петлею по склу на площі приблизно 4 см. 2 . Суспензію нормальної густоти розмазують тонким шаром по склу, потім сушать мазок на повітрі при кімнатній температурі або слабкому нагріванні, тримаючи препарат високо над полум'ям пальника. Сильне нагрівання препарату при сушінні не рекомендується, оскільки білки коагулюють, спотворюючи структуру та форму клітин. Висушений препарат фіксують.

Фіксація мазка. Проводять над полум'ям пальника щодо форми клітин. У першому випадку препарат три-чотири рази повільно проводять нижньою стороною над племенем пальника.

Фарбування препарату. На мазок наносять кілька крапель барвника. Залежно від виду барвника та мети дослідження тривалість фарбування змінюється від 1 до 5 хв, в окремих випадках до 3 хв та довше. Після закінчення фарбування препарат промивають водою, фільтрувальним папером видаляють воду, підсушують на повітрі та мікроскопують.

Існують прості та диференційовані методи забарвлення. При простому фарбуванні використовують якийсь один барвник, наприклад метиленовий синій, фуксин, генціан фіолетовий у лужних або карболових розчинах. Профарбовується вся клітка. При диференційованому фарбуванні окремі структури клітини забарвлюються різними барвниками. Такі методи забарвлення за Грамом, забарвлення суперечка.

Контрольні питання:

1. Розкажіть принцип приготування препарату методом розчавленої краплі.
2. Розкажіть принцип приготування препарату методом «висячої» краплі.
3. Як проводиться фіксація мазка?
4. Як проводиться фарбування препарату?

Лабораторна робота №2

Найпростіші мікробіологічні дослідження

Мета: вивчення різних форммікроорганізмів

Тривалість заняття: 2 год

Обладнання: Мікроскопи.

Програма заняття

1. Мікроскопія підготовлених препаратів.

2. Заповнення звітів.

Завдання для виконання лабораторної роботи:

Вивчити форми бактерій, грибів, дріжджів.

Методика виконання:

1. Вивчити форму грибів роду Penicilium.

Обережно за допомогою двох препарувальних голок шматочок міцелію знімають із середовища та поміщають у краплю води на предметне скло. Зверху кладуть покривне скло (метод розчавленої краплі).

Скляною паличкою або препарувальною голкою трохи натискають на центр покривного скла. Надлишок води видаляють фільтрувальним папером.

Препарат проглядають спочатку при малому збільшенні, приділяючи основну увагу краям, так як на них зазвичай добре видно кисті конідієносців. Коли відповідну ділянку знайдено, переходять з об'єктива 8х на об'єктив 40х і детально розглядають пензлики.

1. Вивчити форму пекарських дріжджів.

Розмножуються брунькуванням. При брунькаванні на материнській клітині виникає маленька опуклість - "нирка" - це дочірня клітина, в яку переходить одне ядро, клітина збільшується в розмірах і відокремлюється. Якщо умови для такого розмноження є сприятливими (достатня кількість цукру, відповідна температура, аерація), процес йде дуже швидко. У деяких представників роду клітини після брунькування не встигають роз'єднуватися і виникає псевдоміцелій (хибний міцелій).

Невеликий шматочок дріжджової маси за кілька годин до занять поміщають у теплу підцукровану воду та ставлять у тепле місце. Утворюється білувата каламутна рідина. На предметне скло наносять її краплю, підсушують у повітрі. Клітини добре видно при менших збільшеннях.

У пекарських дріжджах зазвичай присутні дві раси: одна представлена ​​округло-еліпсоподібними клітинами, що швидко роз'єднуються при брунькаванні; інша - подовжено-циліндричними, що утворюють під час брунькування гіллясті кущики (псевдоміцелій). На багатьох клітинах видно бруньки. У дрібнозернистому вмісті живих дріжджів добре помітні великі прозорі вакуолі, які іноді займають центральне положення.

1. Вивчити мікрофлору ротової порожнини.

За допомогою зубочистки нанести на предметне скло зубний наліт. Провести фіксацію, обробити барвником (розчином фуксину), промити, видалити надлишки води фільтрувальним папером, підсушити на повітрі і мікроскопувати.

додаток

Мал. 1. Форма бактерій:

куляста: а - мікрококи; б-диплококи; е - тетракоки; г-стрептококи; д - стафілококи; е – сарцини; паличкоподібна; ж - які не утворюють суперечку; з, і, до - споро-утворювальні (з - бацилярного, і - клостридіального, до - плектридіального типів спороношення); звита: л - вібріони;м - спірили; н – спірохети

Мал. 2. Мікроскопічні гриби:

а – Мисог; б - Aspergillus; в- Penicillium; a - Fusarium; д - Trichoderma;

E – Alternarla; ж - дріжджі нирки; з - діляться

Мал. 3. Дріжджі Saccharomyces cerevisiae у стадії брунькування

Контрольні питання:

1. Перерахувати фактори, що впливають на розвиток мікробів
2. Яка оптимальна температура розвитку цвілевих грибів та дріжджів?
3. Опишіть форму пекарських дріжджів.
4. Які форми бактерій ротової порожнини?

Лабораторна робота №3

Приготування та аналіз дезінфікуючих розчинів

Тривалість заняття: 2 год

Обладнання: хлорне вапно (део - хлор), мікроскопи.

Програма заняття

1. Приготування дезінфікуючих розчинів різної концентрації.

2. Вивчення змивів із устаткування.

Завдання для виконання лабораторної роботи:

Вивчити дію дезінфікуючих розчинів на мікроорганізми

Методика виконання:

1) На підприємствах громадського харчування дезінфекцію проводять із профілактичною метою, щоб попередити можливість зараження мікробами харчових продуктів та готової їжі. Для проведення дезінфекції використовують фізичні та хімічні методи.

При виборі цих коштів для підприємств комунального харчування слід звертати увагу на наявність:

Свідоцтва про реєстрацію із зазначенням можливості використання дезинфікуючих коштів на підприємстві громадського харчування;

Сертифікат відповідності - документ, що підтверджує відповідність даного дезінфікуючого засобу вимогам стандарту;

Інструкції із застосування дезінфікуючих засобів.

Хлорне вапно (неорганічна речовина), розчини різної концентрації якого застосовують для дезінфекції приміщень підприємств громадського харчування, обладнання, інвентарю, посуду. При цьому знищуються вегетативні та спорові форми мікробів. Зазвичай готують 10%-ний освітлений розчин хлорного вапна, розчиняючи 1 кг сухого хлорного вапна в 10 л води і наполягаючи його протягом 24 годин у скляному посуді в темному місці. Цей розчин зберігають протягом 5 діб і використовують для отримання більш низької концентрації розчинів шляхом розведення його водою;

Спосіб приготування дезінфікуючих засобів

п/п	Найменування	Концентрація, %	Призначення	Спосіб приготування
	Хлорне вапно	10 (початкова)	Обробка контейнерів для харчових відходів	1 кг хлорного вапна на 10 л води, відстоювати 24 год, злити з осаду
			Обробка раковин, умивальників, унітазів	5 л вихідного розчину розчинити у 10 л води
			Дезінфекція обладнання та інвентарю	2 л вихідного розчину розчинити у 10 л води
		1 (робоча)	Обробка приміщень (підлоги, стіни, двері та ін.)	1 л вихідного розчину розчинити у 10 л води
			Обробка обладнання	0,5 л вихідного розчину розчинити у 10 л води
				0,2 л вихідного розчину розчинити у 10 л води
	Хлорамін Б		Дезінфекція столового посуду, рук	20 г (1 ст. ложка) розчинити у 10 л води
			Дезінфекція приміщень, обладнання	50 г (2,5 ст. ложки) розчинити у 10 л води
	Гіпохлорит кальцію		Дезінфекція столового посуду	10 г (1ч. ложка) розчинити у 10 л води

2) Вивчити дію дезінфікуючих розчинів на мікроорганізми

За допомогою ватної палички нанести на предметне скло змив із обладнання. Провести фіксацію, обробити барвником (розчином фуксину), промити, видалити надлишки води фільтрувальним папером, підсушити на повітрі і мікроскопувати. Обробити обладнання дезінфікуючим розчином, повторно підготувати препарат і мікроскопувати.

Контрольні питання:

1. Які форми бактерій є на поверхні обладнання?
2. Як реагують мікроорганізми надезінфікуючі розчини?
3. Яка концентрація вихідного розчину?

Лабораторна робота №4

Санітарна обробка обладнання, посуду, інвентарю

Мета: формування умінь готувати дезінфікуючі розчини для обробки обладнання, інвентарю, посуду

Тривалість заняття: 4 год

Обладнання: дезінфікуючий розчин, технологічне обладнання кулінарного та кондитерського цеху.

Програма заняття

1. Приготування дезінфікуючих розчинів необхідної концентрації.

2. Вивчення правил обробки устаткування, інвентарю, посуду.

Завдання для виконання лабораторної роботи:

Вивчити правила обробки обладнання, інвентарю, посуду дезінфікуючими розчинами

Методика виконання:

1. Вивчити санітарно-епідеміологічні вимоги до обладнання, інвентарю, посуду.
2. Обробити обладнання, інвентар, посуддезінфікуючими розчинами необхідної концентрації
3. На основі отриманих раніше знань та умінь зробити висновки щодо необхідності своєчасної санітарної обробки обладнання, інвентарю, посуду.

Контрольні питання:

1. Як правильно миють та дезінфікують механічне обладнання, у тому числі зі знімними робочими частинами?
2. Які санітарні вимоги пред'являються до влаштування та утримання виробничих столів?
3. Які санітарні вимоги висуваються до змісту теплового обладнання?
4. Яким є значення маркування обробних дощок, ножів?
5. Яка послідовність миття столового посуду ручним способому мийних ваннах?

Практичне заняття №1

Заходи запобігання виробничому травматизму, надання долікарської допомоги

Ціль формування умінь уникнути виробничого травматизму та надати першу долікарську допомогу

Тривалість заняття – 4 години

Завдання:

Опанувати вміння попередити виробничий травматизм.

Розвивати вміння надання першої долікарської допомоги постраждалим

Обладнання: типові інструктажі з техніки безпеки, додатковий теоретичний матеріал щодо надання першої долікарської допомоги постраждалим (з ілюстраціями)

Завдання: вивчити запропонований теоретичний матеріал та виконати практичну будівлю: провести інструктаж з техніки безпеки; надати першу допомогу постраждалим.

Охорона праці та техніка безпеки

1. Законодавство з охорони праці та техніки безпеки

Охорона здоров'я трудящих, забезпечення безпечних умов праці, ліквідація професійних захворювань та виробничого травматизму становлять одну з головних турбот нашої держави.

Відповідно до Конституції Росії громадянам забезпечуються рівноправність у сфері праці, незалежно від національності та статі. Жінці надано рівні права з чоловіком на працю, оплату його, відпочинок та соціальне забезпечення.

Захист трудових правгромадян здійснюється державними організаціямита професійними спілками. В основах законодавства країни приділено велику увагу створенню сприятливих умов праці життя та здоров'я людини. Воно включає комплекс правових, технічних і санітарно-гігієнічних заходів.

Заходи з охорони праці розробляються на основі Конституції країни та їх виконання покладається на адміністрацію підприємств та організацій. Організація повинна впроваджувати сучасні засоби захисту, що запобігають виробничому травматизму та забезпечують санітарно-гігієнічні умови, що запобігають виникненню професійних захворювань.

Охорона праці Росії - це широкий комплекс правових, санітарно-гігієнічних, технічних і організаційних заходів, вкладених у створення здорових, безпечних і високопродуктивних умов праці підприємствах комунального харчування.

Техніка безпеки є одним з основних завдань «Охорони праці», яка включає комплекс технічних та організаційних заходів, спрямованих на створення та впровадження безпечної техніки, безпечних виробничих процесів, засобів автоматичного зв'язку – та сигналізації, огороджувальних та запобіжних пристроїв, а також засобів індивідуального захисту, що запобігають можливості виробничого травматизму.

На кожному підприємстві взаємовідносини робітників та службовців з адміністрацією обумовлюється у вигляді колективного договору, який укладається місцевим комітетом профспілки від імені робітників та службовців з адміністрацією підприємства. Укладення колективного договору передує обговорення та схвалення його проекту на зборах робітників та службовців. Цей договір поширюється усім робітників і службовців підприємства, незалежно від цього, чи він членом профспілки.

Колективний договір містить основні положення з питань праці та заробітної плати, встановлені для даного підприємства, відповідно до чинного законодавства, а також положення в галузі робочого часу, часу відпочинку, оплати праці та матеріального стимулювання, охорони праці, розроблені адміністрацією підприємства та колективом профспілки у межах наданих їм прав.

Законодавство, охороняючи встановлену тривалість робочого дня (40 годин), на тиждень зазвичай не допускає проведення понаднормових робіт. Проведення таких робіт допускається у виняткових випадках, але навіть за наявності законних підстав для проведення понаднормових робіт, адміністрація підприємства не має права здійснювати їх без дозволу Комітету профспілки.

Трудове законодавство виявляє виняткову турботу про підростаюче покоління та передбачає найбільш сприятливі умови для праці, відпочинку та навчання підлітків.

Прийом на роботу допускається, починаючи з 16 років, із шести з годинним робочим днем, за збереження оплати за повний робочий день як для дорослих працівників відповідної категорії. Забороняється використовувати працю підлітків у нічний та понаднормовий час. Підлітки не допускаються до робіт зі шкідливими та важкими виробничими умовами.

Усім робітникам та службовцям встановлено щорічну оплачувану відпустку тривалістю не менше 24 робочих днів. Жінкам надаються й багато інших пільг згідно з чинним законодавством.

Адміністрація підприємства громадського харчування зобов'язана забезпечувати видачу, зберігання, прання та ремонт спецодягу, спецвзуття та інших засобів індивідуального захисту. Контроль за дотриманням виконання законів про охорону праці, техніку безпеки та виробничу санітарію здійснюється органами державної інспекції з праці та професійними спілками. Контроль за дотриманням підприємствами санітарно-гігієнічних умов праці – Державна санітарно-епідеміологічна служба, а за дотриманням підприємствами пожежної безпеки – Державний пожежний нагляд.

Комітет профспілки здійснює також контроль за роботою підприємства громадського харчування та виконання адміністрацією законодавства про працю, правил і норм з техніки безпеки та виробничої санітарії. При невиконанні зобов'язань за колективним договором, недотримання норм і правил з охорони праці та техніки безпеки Комітет профспілки має право порушувати питання про покарання або усунення з посади керівних працівників підприємства.

2. Організація роботи з охорони праці

Робота з охорони праці на підприємствах повинна бути організована відповідно до Положення про організацію роботи з охорони праці, розробленого з урахуванням чинного галузевого Положення про організацію роботи з охорони праці та затвердженого керівником підприємства.

У Положенні має бути зазначено, що загальне керівництво та відповідальність за організацію та проведення роботи з охорони праці загалом по підприємству покладається на його керівника (власника), а у структурних підрозділах підприємства – на їх керівників.

На підприємстві Положенням має бути встановлений порядок:

Організація проведення та періодичність навчання працівників безпеки праці;

Проведення та періодичність інструктажів з безпеки праці;

Проведення роботи з пожежної безпеки;

проведення робіт підвищеної небезпеки з видачею наряду допуску;

Проведення вантажно-розвантажувальних робіт;

Технічне обслуговування устаткування;

Закріплення обладнання за людьми, відповідальними за його правильну та безпечну експлуатацію при користуванні;

Забезпечення та видача працівникам спецодягу та засобів індивідуального захисту;

Контроль за дотриманням правил та норм з охорони праці по підприємству загалом та його структурних підрозділів.

Практична робота з охорони праці проводиться спеціальною службою, інженером з охорони праці або особою, на яку наказом на підприємстві покладено цю роботу, підпорядкованою безпосередньо керівнику підприємства.

Навчання працівників безпеки праці повинно проводитись на всіх підприємствах громадського харчування незалежно від характеру та ступеня небезпеки виробництва, а також незалежно від форм власності.

Інструктаж та навчання безпечним прийомам та методам роботи проводиться для всіх працюючих та інженерно-технічних працівників на всіх ділянках, незалежно від стажу, кваліфікації та досвіду працюючого, а також для осіб, які прибули на підприємство для проходження виробничої практики.

На підприємствах громадського харчування інструктаж з безпеки праці за характером та часом проведення поділяють на вступний, первинний на робочому місці, повторний, позаплановий та цільовий.

Вступний інструктаж.Вступний інструктаж з безпеки праці проводять з усіма знову прийнятими працювати незалежно від своїх освіти, стажу роботи з даної професії чи посади, з тимчасовими працівниками, відрядженими, учнями і студентами, які прибули на виробничу практику.

Вступний інструктаж проводиться за програмою, затвердженою керівником підприємства. Цей інструктаж повинен проводити керівник підприємства або працівник, на якого наказом керівника підприємства покладено практичну роботу з охорони праці та техніки

безпеки.

Під час проведення вступного інструктажу з техніки безпеки адміністрація підприємства зобов'язана ознайомити працівника:

З основними положеннями Законодавства про працю;

із правилами внутрішнього трудового розпорядку;

З основними вимогами електробезпеки;

З порядком складання акта про нещасний випадок, пов'язаний з

виробництвом;

З порядком надання першої допомоги постраждалим від електричного струму та за інших нещасних випадків;

З загальними вимогамидо організації та утримання робітників

місць;

З вимогами особистої гігієни та виробничої санітарії, призначенням та використанням санспецодягу, санспецвзуття та запобіжних пристроїв.

Про проведення вступного інструктажу роблять запис у журналі реєстрації вступного інструктажу з обов'язковим підписом інструктованого та інструктуючого, а також у документі про прийом на роботу. Поряд із журналом може бути використана особиста картка проходження навчання.

Первинний інструктаж.Первинний інструктаж на робочому місці повинні проходити всі працівники і учні, що знову надходять, направляються на підприємства для проходження виробничої практики, а так само працівники переведені з однієї роботи на іншу або з обслуговування одного виду обладнання на інший.

Без інструктажу на робочому місці жоден працівник не повинен допускатись до роботи.

Інструктаж на робочому місці повинні проводити керівники тих структурних підрозділів, у безпосередньому підпорядкуванні яких будуть перебувати працівники, що інструктуються.

У невеликих підприємствах, які мають структурних підрозділів, проведення інструктажу доручається керівника підприємства.

Під час проведення інструктажу з техніки безпеки на робочому місці працівник повинен бути детально ознайомлений:

З пристроєм обладнання, на якому належить працювати працівнику і який він обслуговуватиме;

З усіма небезпечними місцями біля машини, із запобіжними огорожами, пристроями та засобами індивідуального захисту, з їх призначенням та правилами користування;

З правильною та безпечною організацією обслуговування*! робочого місця;

з порядком підготовки до роботи (перевірка справності обладнання, заземлення, інструменту, інвентарю тощо);

З безпечними та правильними прийомами роботи та наслідками застосування неправильних прийомів роботи;

З інструкцією з техніки безпеки устаткування, що обслуговується;

З порядком безпечного пересування територією підприємства.

Інструктаж повинен супроводжуватися показом дома правильних прийомів роботи з повторенням працівниками цих прийомів. Інструктуючий повинен переконатися у чіткому знанні та розумінні кожним працівником правил техніки безпеки.

Повторний інструктаж.Повторний інструктаж на робочому місці повинні проходити всі працівники, незалежно від кваліфікації, освіти та стажу роботи. Він проводиться з метою кращого засвоєння, поглиблення та закріплення знань з безпечних прийомів та методів праці.

Якщо в результаті перевірки будуть виявлені незадовільні знання працівником інструкцій з техніки безпеки, інструктуючий зобов'язаний дати працівникові всі необхідні пояснення та безпосередньо на робочому місці показати як потрібно правильно працювати безпечними методами та вимагати суворого виконання всіх вимог інструкцій з техніки безпеки. Інструктаж має підкріплюватися докладним розборомприкладів із практики підприємства.

Позаплановий інструктаж.Позаплановий інструктаж проводиться:

При введенні в дію нових або перероблених стандартів, правил, інструкцій з охорони праці, а також змін до них;

При зміні технологічного процесу, заміні або модернізації обладнання, пристроїв та інструменту, вихідної сировини, матеріалів та інших факторів, що впливають на безпеку праці;

При порушенні працівником вимог безпеки праці, які можуть призвести до травми, аварії, або пожежі, отруєння;

на вимогу органів нагляду;

При перервах у роботі - до робіт, яких пред'являють додаткові (підвищені) вимоги безпеки праці, - більш як 30 календарних днів, а інших робіт - 60 днів.

Цільовий інструктаж.Цільовий інструктаж проводять при виконанні разових робіт, не пов'язаних із прямими обов'язками за спеціальністю, ліквідації наслідків аварій, стихійних лих та катастроф, провадженні робіт, на які оформляється наряд-допуск, дозвіл та інші документи. Проведення всіх видів інструктажу оформляється у спеціальному журналі реєстрації встановленої форми. Сторінки журналу мають бути пронумеровані, прошнуровані та скріплені печаткою.

Відповідно до вимог органів охорони здоров'я кожен працівник комунального харчування проходить періодичні медичні огляди.

Періодичність медичних оглядів, які працівник має відбуватися під час роботи, встановлюються відповідно до вимог органів охорони здоров'я. Працівник підприємств комунального харчування повинен мати особисту медичну книжку, До якої вносяться результати медичних обстежень.

На підприємствах громадського харчування для підняття та переміщення ваги вручну встановлено норми:

для жінок:

При чергуванні з іншою роботою (до 2 разів на годину) масою понад 10 кг і постійно протягом робочої зміни - масою не більше 7 кг;

Величина маси вантажу, що переміщається, або піднімається за зміну при підйомі з робочої поверхні не повинна перевищувати 5 т. З підлоги або рівня нижче робочої поверхні - 2 тонни.

для чоловіків:

Постійно протягом робочої зміни масою трохи більше 30 кг (вантажнику - трохи більше 50 кг);

Величина маси вантажу, що переміщується або піднімається за зміну (на всіх роботах крім вантажно-розвантажувальних) при підйомі з робочої поверхні не повинен перевищувати 12 т, з підлоги або рівня нижче робочої поверхні - 5 т.

для підлітків від 16 до 18 років:

Якщо ця робота займає трохи більше 1/3 робочого дня - масою трохи більше 16 кг;

При постійному перенесенні тяжкості масою не більше 4 кг. Відстань між працівниками, які переносять вантажі, має бути не

менше 3 метрів.

3. Виробничий травматизм

Нещасним випадком чи травмою називається пригода, у якому внаслідок раптового впливу (механічного, хімічного, теплового) довкілля сталося ушкодження органів людини чи порушення їх нормальної життєдіяльності.

Виробничою вважається травма, отримана працівником чи службовцем під час виконання своїх трудових обов'язків, під час здійснення дії у сфері виробництва чи шляху на роботу і з роботи з транспорті, представленому організацією.

На підприємстві громадського харчування випадки травматизму пов'язані переважно з процесом приготування їжі. Травми відбуваються внаслідок порушення правил техніки безпеки та трудової дисципліни.

Усі випадки виробничого травматизму з виробництва підлягають розгляду та обліку. Гострі отруєння, теплові удари, обмороження не належать до виробничого травматизму, але враховуються як нещасні випадки. Усі нещасні випадки на виробництві, незалежно від того, коли вони сталися, підлягають ретельному розслідуванню та вжиття належних заходів для їх неповторення.

Про нещасний випадок на виробництві постраждалий чи очевидець зобов'язаний повідомити директора підприємства або відповідального за виробництво. Потерпілому надається допомога, а в разі потреби викликають лікаря. Розслідуванню підлягають усі нещасні випадки з виробництва, які викликають втрату непрацездатності терміном на день чи більше. Керівник підприємства спільно з громадським інспектором з охорони праці та відповідальним працівником за охорону праці на виробництві протягом 3 діб спільно розслідують та складають акт за формою Н-1 у чотирьох примірниках.

Розслідуванню підлягають і дрібні нещасні випадки без втрати працездатності оскільки причини які їх, можуть призвести до тяжких травм з виробництва.

Адміністрація підприємства зобов'язана аналізувати всі нещасні випадки, при цьому розробити конкретні заходи щодо їх усунення та контролю за їх виконанням.

4. Пожежна безпека

У нашій країні працює спеціальний органз організації пожежної охорони – Державний пожежний нагляд. У його завдання входить розробка та здійснення заходів щодо усунення причин виникнення пожеж.

Пожежі, як правило, виникають внаслідок порушення та незнання правил пожежної безпеки. Тому для запобігання пожежам важливе значення має регулярний інструктаж про заходи пожежної безпеки.

Виробничі та складські приміщення містять у чистоті та порядку. Після закінчення роботи уважно оглядають: електроустаткування (крім холодильників) має бути вимкнене, газове обладнання - відключено краном на внутрішньому газопроводі, цехи ретельно прибрані.

Користувати тільки вимикачами, розетками, вилками, патронами та іншою електроарматурою.

Не залишати без нагляду увімкнене обладнання та електроприлади. Після закінчення роботи вимикати електричне освітлення (крім аварійного).

Курити тільки у спеціально відведених та обладнаних місцях.

Проходи, виходи, коридори, сходи, тамбури утримувати в чистоті, не захаращуючи тарою та іншими предметами.

Підприємство повинно мати первинні засоби пожежогасіння, що постійно діють.

На підприємствах громадського харчування основними причинами пожежі можуть бути: необережне поводження з вогнем, незадовільний технічний стан електроустаткування, несправність теплового обладнання та сушіння на них спецодягу тощо.

Основними принципами гасіння пожежі є охолодження паливної речовини нижче температури її займання та ізоляція його від доступу кисню повітря або іншого окислювача, що підтримує горіння. Більшість застосовуваних засобів гасіння пожежі впливає на осередок горіння комплексно - припиняє доступ окислювача і перешкоджає передачі тепла від полум'я до горючої речовини одночасно посилюючи тепловіддачу в навколишнє середовище.

До основних засобів пожежогасіння відносяться - вода, водяна пара, повітряно-механічні та хімічні піни, інертні та вуглекислі гази, порошкоподібні сухі склади з двовуглекислої соди, пісок та різні покривала з азбесту, брезенту та інші підручні матеріали.

Кожен працівник громадського харчування повинен дотримуватись чинних правил пожежної безпеки. При виявленні пожежі або ознак горіння (запах диму, запах гару, підвищення температури тощо) необхідно:

Припинити роботу та відключити за допомогою кнопки «Стоп» (вимикача, рубильника, крана тощо) обладнання та електроприлади, що використовується;

Негайно повідомити про це телефоном у пожежну охорону;

Вжити по можливості заходи щодо евакуації людей, гасіння пожежі та збереження матеріальних цінностей.

5. Основні заходи щодо техніки безпеки на виробництві

В даний час важко уявити роботу будь-якого підприємства без застосування електричної енергії. Тим більше підприємства громадського харчування де для приготування та відпустки їжі використовуються різні видитехнологічного електроустаткування.

Широке використання їх призводить до необхідності настільки широкого навчання обслуговуючих працівників з правилами безпечної експлуатації електрообладнання, оскільки порушення цих правил призводить до псування обладнання, пожеж і загибелі людей.

Коли людина перебуває у сфері дії інтенсивної електромагнітного поляабо безпосередньо стикається з провідниками електричного струму, що знаходяться під напругою, по його тілу проходить електричний струм. Внаслідок дії електричного струму на організм може виникнути електротравма, тобто більш менш значні порушення функцій.

Характер та інтенсивність порушень в організмі, спричинених електричним струмом, В основному визначаються видом і величиною струму тривалістю його дії та низкою інших факторів.

Поразка організму людини в більшою міроюзалежить від величини струму, що проходить через життєво важливі органи людини – мозок, центральну нервову систему, серце, органи управління диханням та від індивідуальних особливостей потерпілого

Усі ураження електричним струмом поділяються на два види - електричні травми та електричні удари. Найбільш небезпечними є електричні удари, оскільки викликають порушення фізичних процесів у людини.

Щоб уникнути поразки працюючого персоналу електричним струмом на підприємствах комунального харчування застосовують індивідуальні та загальні засоби захисту.

До індивідуальних засобів захисту відносяться діелектричні рукавички, килимки, калоші та ізолюючі підставки. Рекомендується при роботі з електричним обладнанням мати сухі руки, одяг та взуття.

До загальним засобамзахисту від ураження струмом відносяться захисне заземлення, занулення та автоматичне відключення обладнання.

Устаткування, що працює на газовому паливі, становить підвищену небезпеку, оскільки гази отруйні і при вдиханні можуть спричинити отруєння.

Крім того, газ у певному співвідношенні з повітрям утворює вибухову суміш, яка вибухає від найменшої іскри.

Ось тому в основні заходи з техніки безпеки вносяться питання з техніки безпеки газовим обладнанням.

Пожежна безпека підприємств має забезпечуватись системами запобігання пожежі та протипожежному захисту, у тому числі організаційно-технічними заходами на основі чинного законодавства з охорони праці.

Заземлення (занулення) підлягають:

Корпуси всіх електричних апаратів, машин та обладнання, встановлених на підприємстві громадського харчування;

Приводи електричних апаратів;

Каркаси розподільчих щитів та щитів управління, шаф, якщо на них встановлено електроустаткування, напругою вище 42 В змінного струму;

Металеві корпуси пересувних та переносних електроприймачів;

Електроустаткування, встановлене на рухомих частинах машин та механізмах.

Саме тому справність захисного заземлення (занулення) або системи захисту має велике значення щодо запобігання електротравматизму на підприємствах громадського харчування. Однак потрібно пам'ятати і не забувати при вологому прибиранні приміщення або електроустаткування, що вода та волога ганчірка є гарним провідником електричного струму. Тому категорично забороняється класти вологий спецодяг, металеві предмети на електроустаткування та пристрої, що підводять.

6. Типова інструкція з охорони праці для кухаря

1. Загальні вимоги безпеки

Щоб уникнути нещасного випадку на роботі, кухар зобов'язаний виконувати інструкції з охорони праці.

До роботи в якості кухаря допускаються чоловіки та жінки, не молодші 18 років, які пройшли навчання за фахом.

На робочому місці кухар отримує первинний інструктаж з безпеки праці та проходить стажування правил експлуатації технологічного обладнання, закріпленого за ним.

При експлуатації газовикористовуючого обладнання кухар до призначення на самостійну роботу зобов'язаний пройти навчання безпечним методам та прийомам виконання робіт у газовому господарстві та скласти іспити в установленому порядку.

Під час роботи кухар повинен проходити:

Огляд відкритих поверхонь тіла на наявність захворювань – щодня;

Навчання безпеки праці з діючого обладнання – кожні 2 роки;

Повторну перевірку знань безпечних методів праці та прийомів виконання робіт у газовому господарстві – щорічно;

Перевірку знань з електробезпеки – щорічно;

Перевірку санітарно-гігієнічних знань – щорічно;

періодичний медичний огляд;

Повторний інструктаж з безпеки праці на робочому місці кухар повинен одержувати один раз на 3 місяці;

Кожен кухар має бути забезпечений санітарним одягом, взуттям, санприладдям та засобами індивідуального захисту.

2. Вимоги безпеки перед початком роботи

Кухар зобов'язаний під час роботи носити санітарний одяг, що йому належить: волосся прибране під головний убір, рукави одягу підвернуті до ліктя або застебнуті у кисті рук. Не рекомендується заколювати голками санодяг і тримати в кишенях шпильки, скляні та інші гострі предмети, що б'ються.

Перед початком роботи кухар зобов'язаний упорядкувати своє робоче місцедля безпечної роботи та перевірити:

Справність та холостий хід обладнання;

Наявність та справність огорож;

Наявність та справність заземлення;

Справність іншого обладнання;

Переконатися, що перемикачі електроплит і шафи для смаження знаходяться в нульовому положенні;

Справність та роботу місцевої витяжної вентиляції, повітряного душування.

При виявленні будь-яких неполадок або несправностей в устаткуванні, кухар зобов'язаний негайно заявити завідувача виробництва або адміністрації підприємства і до усунення їх до роботи не приступати.

3. Вимоги безпеки під час роботи

Для запобігання несприятливому впливу інфрачервоного випромінюванняна організм кухар зобов'язаний:

Максимально заповнювати посудом робочу поверхню електричних плит, своєчасно вимикати секції електроплит або перемикати їх на меншу потужність;

Не допускати включення конфорок на максимальну та середню потужність без завантаження;

Не допускати попадання рідини на нагріті конфорки плити; наплитний посуд заповнювати не більше ніж на 80% об'єму;

Не користуватися наплитними котлами, каструлями та ін. кухонним посудом, Що має деформовані дно або краї, неміцно закріплені ручки або без них;

Знімати з плити котел з гарячою їжею без ривків, дотримуючись обережності, удвох, використовуючи сухі рушники або рукавиці, кришку котла слід зняти.

Контролювати тиск та температуру в теплових апаратах у межах, зазначених в інструкціях з експлуатації.

Слідкувати за наявністю тяги в камері згоряння обладнання та показаннями манометрів при експлуатації обладнання, що працює під тиском.

4. Вимоги безпеки у аварійних ситуаціях.

При виявленні несправностей при роботі з механічним, паровим, електричним та газовим обладнанням, а також при спрацьовуванні запобіжного клапана, ширянні, підтікання води потрібно негайно відключити обладнання, повідомити завідувача виробництва або адміністрацію підприємства.

До усунення помічених неполадок приступати до роботи не рекомендується.

Без дозволу адміністрації не дозволяється самому проводити ремонт обладнання або усувати несправність.

5. Вимоги безпеки після закінчення роботи.

Перед відключенням від електричної мережіпопередньо потрібно вимкнути все електричне обладнанняза винятком чергового освітлення та обладнання, що працює в автоматичному режимі.

Після вимкнення газовикористовувальних установок зняти накидні ключі з коркових кранів.

При проведенні санітарної обробки не охолоджувати нагріту поверхню плит, сковорідок та іншого теплового обладнання водою.

Надання першої долікарської допомоги

Хоч би яке нещастя сталося - у будь-якому разі надання першої допомоги слід почати з відновлення серцевої діяльності та дихання. Потім приступати до тимчасової зупинки кровотечі. Після цього можна приступити до накладання фіксуючих пов'язок та транспортних шин.

Як показує практика, саме такий порядок дій допоможе зберегти життя медичного персоналу, який постраждав до прибуття.

Порядок надання першої допомоги:

1. Якщо немає свідомості та немає пульсу на сонній артерії – приступити до реанімації

2. Якщо немає свідомості, але є пульс на сонній артерії, повернути на живіт і очистити ротову порожнину.

3. При артеріальній кровотечі – накласти джгут

4. За наявності ран - накласти пов'язки

5. Якщо є ознаки переломів кісток кінцівок – накласти транспортні шини.

РАПТОВА СМЕРТЬ Ознаки раптової смерті (Коли кожна втрачена секунда може стати роковою) 1. Відсутність свідомості. 2. Немає реакції зіниць світ. 3. Нема пульсу на сонній артерії. ОЗНАКИ БІОЛОГІЧНОЇ СМЕРТІ (КОЛИ ПРОВЕДЕННЯ РЕАНІМАЦІЇ БЕЗПОЗНАЧНО) 1. Висихання рогівки ока (поява «оселедцевого» блиску). 2. Деформація зіниці при обережному стисканні очного яблука пальцями. 3. Поява трупних плям. ЯКЩО НЕМАЄ СВІДОМОСТІ І НЕМАЄ ПУЛЬСУ НА СОННІЙ АРТЕРІЇ 1. Переконатись у відсутності пульсу на сонній артерії (рис 1). НЕ МОЖНА! Втрачати час визначення ознак дихання. 2. Звільнити грудну клітинувід одягу та розстебнути поясний ремінь (рис 2). НЕ МОЖНА! Завдавати удару по грудині і проводити непрямий масаж серця, не звільнивши грудну клітку і не розстебнувши поясний ремінь. 3. Прикрити двома пальцями мечоподібний відросток. НЕ МОЖНА! Наносити удар по мечоподібному відростку або область ключиць (рис 3). 4. Завдати удару кулаком по грудині. Перевірити пульс. Якщо немає пульсу - перейти до наступної позиції 5 (рис 4). НЕ МОЖНА! Наносити удари за наявності пульсу на сонній артерії. 5. Почати непрямий масаж серця. Частота натискання 50-80 разів на хвилину. Глибина продавлювання грудної клітки має бути не менше 3-4 см. НЕ МОЖНА! Розташовувати долоню на грудях так, щоб великий палецьбув спрямований на рятувальника (рис. 5). Затиснути ніс, захопити підборіддя, закинути голову потерпілого і зробити максимальний видих йому в рот (бажано через марлю, серветку або маску рота в рот) (рис 6). НЕ МОЖНА! Зробити «вдих» штучного дихання, не затиснувши попередньо носа постраждалого. 7. При звуженні зіниць, але при відсутності серцебиття реанімацію потрібно проводити до прибуття медперсоналу. АРТЕРІАЛЬНА КРОВОТЕЧА ОЗНАКИ АРТЕРІАЛЬНОЇ КРОВОТЕЧІ 1. Червона кров з рани б'є струменем, що фонтанує. Ознаки венозної кровотечі 1. Кров пасивно стікає із рани. 2. Дуже чорний колір крові. У ВИПАДКАХ АРТЕРІАЛЬНОЇ КРОВОТЕЧІ 1. Притиснути пальцями або кулаком артерію у вказаних точках. (Місця притискання великих кровоносних судин.) До накладання джгута пошкоджену кінцівку слід залишити у піднесеному положенні. На кінцівках точка притискання артерії повинна бути вищою за місце кровотечі. На шиї та голові – нижче рани або в рані (рис 7). НЕ МОЖНА! Втрачати час на звільнення кінцівок від одягу. Накласти кровоспинний джгут. Завести джгут за кінцівку та розтягнути з максимальним зусиллям. (Немає пульсу) Притиснути перший виток джгута і переконатися у відсутності пульсу. Накласти такі витки джгута з меншим зусиллям. Обернути петлю-застібку навколо джгута. Відтягнути петлю і завести вільний кінець джгута. Вкласти записку про час накладання джгута під гумку петлі (рис. 8). Джгут на кінцівку можна накласти лише на 1 годину. Джгут на шию накладають без контролю пульсу та залишають до прибуття лікаря. Для герметизації рани використовують чисту серветку або багатошарову тканину (упаковку бинта). У випадках посиніння та набряку кінцівки (при неправильному накладенні джгута) слід негайно заново накласти джгут. Джгут на стегно накладають через гладкий предмет (бинт) із контролем пульсу на підколінній ямці. ПОРАНИННЯ КІНЦЕВ Як накладати пов'язки на рани 1. Накрити рану будь-якою чистою серветкою, повністю прикривши краї рани. ЗАБОРОНЯЄТЬСЯ! Промивати рану водою (рис. 9). 2. Прибинтувати серветку або приклеїти її лейкопластирем. ЗАБОРОНЯЄТЬСЯ! Вливати в рану спиртові чи будь-які інші розчини. ПРОНИКУЮЧІ ПОРАНЕННЯ ЖИВОТА ЯК НАКЛАДЖУВАТИ ПОВ'ЯЗКИ НА РАНИ 1. Прикрити вміст рани чистою серветкою. 2. Прикріпити серветку, що повністю прикриває краї рани пластиром (рис 10). 3. Підняти ноги і розстебнути поясний ремінь. При нагоді покласти холод на живіт. Очікування допомоги та транспортування - тільки в положенні «лежачи на спині» з піднятими та зігнутими в колінах ногами. ЗАБОРОНЯЄТЬСЯ! Вправляти органи, що випали, Давати пити. ТЕРМІЧНІ ОПІКИ ПРАВИЛА ОБРОБКИ ОПІКУ БЕЗ ПОРУШЕННЯ Цілісності опікових міхур Підставити під струмінь холодної води на 10-15 хвилин І/АБО докласти холод на 20-30 хв. НЕ МОЖНА! Змочувати обпалену поверхню оліями та жирами (рис 11). ПРАВИЛА ОБРОБКИ опіку з порушенням цілісності опікових бульбашок і шкіри 1. Накрити сухою чистою тканиною. 2. Поверх сухої тканини додати холод. ЗАБОРОНЯЄТЬСЯ! Бінтувати обпалену поверхню. Промивати водою (рис. 12). ТРАВМИ ОЧЕЙ РАНИ ОЧЕЙ АБО СТОЛІТТЯ 1. Накрити око чистою серветкою (носовою хусткою). 2. Зафіксувати серветку пов'язкою та обов'язково прикрити цією ж пов'язкою друге око для припинення рухів очних яблук. Усі операції з постраждалим проводити у положенні «лежачи» (рис. 13). НЕ МОЖНА! Промивати водою колоті та різані рани очей та повік. ОПІКИ ОЧ ЧИ СТОЛІТТЯ В ВИПАДКАХ ПОТРАПЛЕННЯ ЇДКИХ ХІМІЧНИХ РЕЧОВИН 1. Розсунути обережно повіки пальцями і підставити під струмінь холодної води. 2. Промити очі під струменем холодної води так, щоб вона стікала від носа до скроні. НЕДОПУСТИМО! Застосовувати рідину, що нейтралізує, при потраплянні в очі їдких хімічних речовин (кислота-луг) (рис 14). ПЕРША ДОПОМОГА В ВИПАДКАХ УРАЖЕННЯ ЕЛЕКТРИЧНИМ СТРУМОМ НЕ МОЖНА! Приступати до допомоги, не звільнивши постраждалого від дії електричного струму. ДІЇ У ВИПАДКАХ УРАЖЕННЯ ЕЛЕКТРИЧНИМ СТРУМОМ Якщо немає свідомості та немає пульсу на сонній артерії Переконатися у відсутності реакції зіниці. Переконатися у відсутності пульсу на сонній артерії. Завдати удару кулаком по грудині. Прикласти холод до голови. Підняти ноги. Зробити «вдих» штучного дихання. Розпочати непрямий масаж серця. Продовжувати реанімацію. Викликати швидку допомогу". Якщо немає свідомості, але є пульс на сонній артерії Знеструмити постраждалого. (Не забувай про власну безпеку!) Переконатись у наявності пульсу. Повернути на живіт та очистити рот. Прикласти холод до голови. На рани накласти пов'язки. Накладіть шини. УВАГА! За відсутності пульсу на сонній артерії – завдати удару кулаком по грудині і приступити до реанімації. При комі (втрата свідомості більш ніж на 4 хв, але наявності пульсу на сонній артерії) – повернути на живіт. При електричних опіках та ранах – накласти пов'язки. При переломах кісток кінцівок – шини. Викликати швидку допомогу". НЕДОПУСТИМО! Торкатися постраждалого без попереднього знеструмлення. Припиняти реанімаційні заходи до появи ознак біологічної смерті. Непритомність Ознаки непритомності 1. Короткочасна втрата свідомості (трохи більше 3-4 хвилин). 2. Втраті свідомості передують: різка слабкість, запаморочення, дзвін у вухах та потемніння в очах. Схема дій у випадках непритомності 1. Переконатись у наявності пульсу на сонній артерії (рис 15). 2. Звільнити грудну клітину від одягу та розстебнути поясний ремінь (рис 16). 3. Підняти ноги (рис. 17). 4. Натиснути больову точку (рис 18). НЕДОПУСТИМО! Прикладати грілку до живота або попереку при болях у животі або повторних непритомності. УВАГА! Якщо немає пульсу на сонній артерії – приступити до комплексу реанімації. Якщо є пульс на сонній артерії – підняти ноги, розстебнути комір сорочки, послабити краватку та поясний ремінь. Натиснути на больову точку. Якщо протягом 3 хвилин свідомість не з'явилася – повернути постраждалого на живіт та прикласти холод до голови. При появі болю в животі або повторної непритомності - покласти холод на живіт. При тепловому ударі - перенести у прохолодне місце, прикласти холод до голови та грудей. У всіх випадках непритомності необхідно викликати лікаря.

ПОКАЗАННЯ ДО ПРОВЕДЕННЯ ОСНОВНИХ МАНІПУЛЯЦІЙ

КОЛИ СЛІД НАКЛАДЖУВАТИ ПОВ'ЯЗКИ, що ДАВИТЬ

1. При кровотечах, якщо кров пасивно стікає із рани.

2. Відразу після звільнення кінцівок при синдромі здавлення.

КОЛИ СЛІД НЕПОВІДНО

1. Пунсова кров з рани б'є струменем, що фонтанує.

2. Над раною утворюється валик з крові, що витікає.

3. Велика кривава пляма на одязі чи калюжа крові біля постраждалого.

КОЛИ НЕОБХІДНО НАКЛАДЖУВАТИ ЗАХИСНІ ЖГУТИ

У випадках синдрому стискання до звільнення кінцівок.

КОЛИ НЕОБХІДНО НАКЛАДАТИ ШИНИ НА КІНЦЕВОСТІ

1. Видно кісткові уламки.

2. При скаргах на біль.

3. При деформації та набряках кінцівок.

4. Після звільнення пригнічених кінцівок.

КОЛИ НЕОБХІДНО ПЕРЕНОСИТИ ПОСТРАДАЛИХ НА ЩИТІ З ПІДЛОЖЕНИМ ПІД КОЛІНА ВАЛИКОМ АБО НА ВАКУУМ-НОСИЛАХ У ПОЗІ «ЖАБИ»

1. При підозрі перелом кісток таза.

2. За підозри на перелом верхньої третини стегнової кісткита пошкодження кульшового суглоба.

3. При підозрі на пошкодження хребта та спинного мозку.

КОЛИ ПОСТРАЖЕНИХ ПЕРЕНОСЯТЬ ТІЛЬКИ НА ЖИВОТІ

1. у стані коми.

2. При частій блювоті.

3. У випадках опіків спини та сідниць.

4. При підозрі на пошкодження спинного мозку, коли є тільки брезентові ноші.

КОЛИ ПОСТРАЖЕНИХ МОЖНА ПЕРЕНОСИТИ І ПЕРЕВОЗИТИ ТІЛЬКИ СИДЯЧИ ЧИ НАПІВСИДЯ

1. При пораненнях грудної клітки.

2. При пораненнях шиї.

КОЛИ ПОСТРАЄ МОЖНА ПЕРЕНОСИТИ ТІЛЬКИ НА СПІНІ З ПІДПІДНЯТИМИ АБО ЗІГНУТИМИ У КОЛІНЯХ НОГАМИ

1. При пораненнях черевної порожнини.

2. При великій крововтраті або при підозрі на внутрішню кровотечу.

АПТЕЧКА ДЛЯ НАДАННЯ ПЕРШОЇ ДОПОМОГИ

ЗАСОБИ ДЛЯ Зупинки кровотеч, оброблення ран і накладання пов'язків, а також дезінфекції рук рятувальника та медичного обладнання

Контрольні питання:

1. Назвіть організації, які повинні контролювати дотримання законів з охорони праці.

2. Чому потрібне захисне заземлення для електричного обладнання?

3. Назвіть можливі причининещасних випадків на виробництві.

4. Перерахуйте інструктажі з техніки безпеки, що проводяться на підприємстві.

5. Назвіть основні питання інструкції з техніки безпеки для кухаря під час роботи на виробництві.

Практичне заняття

Диференційований залік

Ціль перевірити якість підготовки учнів з дисципліни

Тривалість заняття – 2 години

Обладнання: картки із завданнями

Завдання: вивчити завдання, підготуватися та відповісти

1. Основні види бактерій, їх розмноження.
2. Чинники, що впливають розвиток мікроорганізмів.
3. Поширення мікробів у природі.
4. Мікробіологія харчових продуктів.
5. Гострі кишкові інфекції.
6. Зоонози.
7. Харчові отруєння бактеріального походження.
8. Харчові отруєння немікробного походження.
9. Глистяні захворювання.
10. Особиста гігієна працівників підприємств комунального харчування.
11. Попередження виробничого травматизму.
12. Санітарні вимоги до планування та влаштування приміщень.
13. Санітарні вимоги до водопостачання, каналізації, опалення, вентиляції, освітлення.
14. Дезінфекція та дезінфікуючі засоби, боротьба з комахами та гризунами.
15. Санітарні вимоги до обладнання, інструментів.
16. Санітарні вимоги до посуду та тари.
17. Санітарні вимоги до транспортування та зберігання харчових продуктів.
18. Санітарні вимоги до механічної кулінарної обробки продуктів.
19. Санітарні вимоги до теплової обробки харчових продуктів та процесу приготування страв.
20. Санітарні вимоги до приготування холодних, солодких страв та борошняних кондитерських виробів.
21. Санітарний контроль якості готової їжі.
22. Санітарні вимоги до реалізації готової продукції.
23. Вимоги до обслуговування споживачів
24. Виробничий контроль за дотриманням санітарно-епідеміологічних правил на підприємствах комунального харчування.
25. Санітарно – епідеміологічне законодавство.

Список літератури

Основні джерела:

1. Матюхіна, З. П. Основи фізіології харчування, мікробіології, гігієни та санітарії [Текст]: навч. на поч. проф. освіти / З. П. Матюхіна. 6 е вид., Стер. - М: Видавничий центр «Академія», 2012. - 256с.

Додаткові джерела:

1. Єрмакова, В.І. Основи фізіології харчування, санітарії та гігієни [Текст]: навч. посібник для 10-11 кл. загальноосвіт. установ/В.І. Єрмакова. - М.: Просвітництво, 2002. - 79 с.: Іл.
2. Коєва, В.А. Охорона праці на підприємствах комунального харчування [Текст]: навчальний посібник / В.А. Коєва.- Вид. 2-ге, доп. та перероб. Ростов н/Д: Фенікс, 2006. - 224с.
3. Мармузова, Л.В. Основи мікробіології, санітарії та гігієни у харчовій промисловості продуктів [Текст]: підручник для поч. проф. освіти: навчальний посібник для середнього проф. освіти/Л.В. Мармузова. - М.: ПрофОбрІздат, 2001. - 136 с.
4. Матюхіна, З.П. Товарознавство харчових продуктів [Текст]: підручник для поч. проф. освіти: / З.П. Матюхіна. – 4-те изд.стер. – М.: Видавничий центр «Академія», 2012. – 336 с.
5. Трушіна, Т.П. Основи мікробіології, фізіології харчування та санітарії для громадського харчування [Текст]: навч. посібник/Т.П. Трушина. - Ростов н / Д: Фенікс, 2000. - 384 с.
6. Чернікова, Л.П. Санітарія та гігієна в торгівлі та харчовій промисловості [Текст]: навчальний посібник / Л. П. Чернікова. – Ростов н/Д: Фенікс, 2008. – 319 с. - (Середня професійна освіта).
7. Качуріна, Т.А. Основи фізіології харчування, санітарії та гігієни. Робочий зошит [Текст]: навч. посібник для поч. проф. освіти/Т.А. Качуріна. - М.: Видавничий центр «Академія», 2009. - 96с.
8. Лутошкіна, Г.Г. Гігієна та санітарія громадського харчування [Текст]: навч. посібник/Лутошкіна Г.Г.- М.: Видавничий центр «Академія», 2010. - 64с.

Інтернет ресурси:

1. Короткий теоретичний курс з дисципліни «Основи мікробіології, вірусології, імунології» Електронний ресурс]. - режим доступу:http://www.collegemicrob.narod.ru/microbilogy/index.html , Вільний. - Загл. з екрану. – (Дата звернення: 28.08.2014)

Департамент освіти міста Москви

Технологічний коледж №28

Жукова Л.А.

МЕТОДИЧНІ ВКАЗІВКИ

до лабораторних робіт №№1-4

Для учнів професії НУО

Москва

2012

«Основи мікробіології, санітарії та гігієни»

МЕТОДИЧНІ ВКАЗІВКИ

до лабораторних робіт №№1-4

для учнів професії НУО

34.17 Оператор ковбасного виробництва.

_______________________________________________________________

Посібник призначений студентам коледжу. Може бути використано для самостійної підготовки до навчальних занять та позааудиторної самостійної роботи.

Упорядник: Жукова Л.А. – викладач спеціальних дисциплін

Рецензент: Суханова Н.В. – викладач спеціальних дисциплін

Редактор: Малькова Л.А. – заступник директора з навчально-методичної роботи

Рукопис розглянуто та обговорено на засіданні ЦМК Технологічних дисциплін, протокол № __ від __ _______ 2012р.

ПОЯСНЮВАЛЬНА ЗАПИСКА

Методичні вказівки розроблені відповідно до чинної програми курсу мікробіології, прийнятої ДАОУ СПО міста Москви Технологічним коледжем №28 для студентів, які навчаються за спеціальністю 260301 «Технологія м'яса та м'ясних продуктів».

На сучасному рівні розвитку природничих наукпотрібні глибокі знання мікробіологічних процесів, що лежать в основі багатьох біотехнологічних виробництв і гарантії захисту навколишнього середовища від антропогенного впливу.

Крім придбання теоретичних знань з мікробіології майбутнім спеціалістам необхідні лабораторно-практичні заняття, які є насправді невеликими науково-дослідними роботами.

Виконання лабораторних робіт забезпечує закріплення теоретичних знань студентів, розвиток навичок з мікробіологічного контролю та здібностей до самостійних висновків та узагальнення.

Дані методичні вказівкиз виконання лабораторних робіт пропонують:

об'єднати лабораторні роботи з однієї теми чи мають одне змістове зміст те щоб зручно було їх організувати у часі, як це вимагає специфіка мікробіологічних аналізів;

розподілити заняття так, щоб завантаженість останнього заняття давала змогу обговорити результати аналізу, провести залік із виконаної роботи;

сконцентрувати найважливіший навчальний матеріал, що дозволяє студентам без зайвої завантаженості освоїти практичні навички роботи у мікробіологічній лабораторії;

дати методику проведення аналізу із зазначенням сутності методу, техніки виконання, правил обробки результатів;

використовувати методи мікробіологічного аналізу, передбачені ГОСТом.

Тема та мета роботи.

Матеріальне забезпечення роботи.

Рекомендації щодо виконання лабораторної роботи, завдання, пояснення до роботи, методика проведення аналізів, форми для складання звіту, контрольні питання до лабораторних питань та додаткова література.

Зважаючи на складність деяких методів та тривалість вирощування мікроорганізмів в окремих випадках частину лабораторного матеріалу готує заздалегідь викладач, але методика приготування його наводиться.

Навички, набуті на лабораторних заняттях, необхідні для проведення мікробіологічного контролю виробництва, мета якого полягає в тому, щоб своєчасно виявити порушення санітарного стану виробництва та обладнання, виявити місця та шляхи мікробного забруднення, вжити необхідних заходів щодо ліквідації цих небезпечних вогнищ та домогтися випуску продукції високого якості.

ПРАВИЛА РОБОТИ В МІКРОБІОЛОГІЧНІЙ ЛАБОРАТОРІЇ

Робота в мікробіологічній лабораторії потребує суворого дотримання спеціальних правил, що визначається двома основними положеннями.

Перше – у мікробіологічній практиці використовують, головним чином, чисті культури мікроорганізмів, т. е. популяції мікроорганізмів одного виду, які часто є потомством однієї клітини.

Оскільки в повітрі, на поверхні навколишніх предметів, на одязі, руках, волоссі завжди є велика кількість різноманітної мікрофлори, то для забезпечення стерильності досліджень і, щоб уникнути забруднення культур, робота повинна проводитися з дотриманням правил асептики.

Друге - при дослідженнях з неідентифікованими мікроорганізмами, при їх виявленні з об'єктів навколишнього середовища та техногенних потоків, можуть бути виділені патогенні та умовно-патогенні мікроорганізми.

Крім того, клітини як сапрофітних, так і патогенних мікроорганізмів можуть бути алергенами для певних індивідуумів. Таким чином, для отримання достовірних результатів досліджень, для забезпечення особистої безпеки та безпеки оточуючих необхідно дотримання певних правил.

При пересіванні мікроорганізмів стерильність досягається за рахунок того, що вся робота проводитьсяпоблизу полум'я пальники. Бактеріологічні петлі, що використовуються для пересівання мікроорганізмів з твердих середовищ, прожарюють у полум'ї пальника, а скляний посуд та живильні середовища попередньо стерилізують у сушильних шафах та автоклавах відповідно.

Поверхня робочого столу дезінфікують як перед роботою, так і після її закінчення, протираючи 3% розчином хлораміну, лізолу або 70% розчином ізопропілового або етилового спирту. Розчини цих спиртів можуть застосовуватися і для дезінфекції рук.

Підготовка приміщення включає мокре прибирання та ретельну вентиляцію з подальшим опроміненням ультрафіолетовим світлом бактерицидних ламп. Залежно від ступеня забрудненості повітря для його стерилізації потрібно опромінення від 30 хвилин до кількох годин. Ультрафіолетові промені є небезпечними для очей, тому при включеній бактерицидній лампі в приміщенні перебувати не можна.

При роботі в мікробіологічній лабораторії учні повинні дотримуватись наступних правил:

1. Кожен студент має працювати на постійному місці.
2. На робочому місці не повинно бути сторонніх предметів (у тому числі портфелів та сумок). Під час роботи з пальником на столі не повинно бути також зошитів, які знадобляться пізніше при мікроскопії та замальовуванні препаратів.
3. Вся робота виконується у чистому халаті. Довге волоссяповинні бути підібрані, щоб уникнути їх потрапляння в полум'я грілки.
4. На посуді, що застосовується для культивування мікроорганізмів (пробірки, колби, чашки Петрі, матраци), повинні бути зроблені написи, що містять родову та видову назву культури, дату засіву, прізвище студента та номер групи.
5. Всі предмети, використані при роботі з живими культурами, повинні бути знезаражені або обпалюванням в полум'ї пальника, або занурені в дезінфікуючий розчин (предметне та покривне скло, піпетки, шпателі).
6. Усі засіяні пробірки, чашки чи колби поміщаються у термостат чи здаються лаборанту.
7. Відпрацьований матеріал міститься у певні ємності для їх подальшого знезараження.
8. У лабораторії суворо забороняється куріння та прийом їжі.
9. Наприкінці занять кожен студент повинен упорядкувати робоче місце.

Отримані дані мають бути зафіксовані у журналі для лабораторних робіт. Записи повинні містити: номер та назву роботи, дата її початку та закінчення, назви об'єктів досліджень, умови проведення дослідів, методи аналізів, а також отримані результати та висновки з них. При вивченні морфології культур робляться їх замальовки за певних збільшення мікроскопа. (На заняттях слід мати кольорові олівці, як мінімум, червоний і синій.) Цифрові дані узагальнюються в таблицях, графіках або діаграмах.

ЛАБОРАТОРНА РОБОТА №1

Організація та обладнання мікробіологічної лабораторії. Влаштування оптичного мікроскопа та правила роботи з ним. Освоєння техніки мікроскопування бактерій.

Мета заняття.

Ознайомити студентів з організацією та обладнанням мікробіологічної лабораторії. Вивчити пристрій оптичного мікроскопа. Ознайомитись з основними формами бактерій.

Матеріальне забезпечення.

Навчальна мікробіологічна лабораторія, оснащена термостатами, стерилізаторами, холодильниками, водяною лазнею, дистилятором, бактерицидними лампами, робочими столами з усім необхідним приладдям, мікроскопами.

Ця лабораторна робота містить значний обсяг навчального матеріалу, тому ознайомити студентів з організацією та обладнанням лабораторії бажано демонстраційним методом.

При вивченні пристрою мікроскопа використовувати плакат, де показані всі деталі.

Завдання.

1. Ознайомитись з поясненням до роботи:

1. Обладнання навчальної мікробіологічної лабораторії.
2. Оснащення та організація роботи виробничої

1. Правила роботи у мікробіологічній лабораторії.
2. Пристрій оптичного мікроскопа та догляд за ним.

Правила роботи із мікроскопом МБР-1.

1. Основні форми бактерій.

1. Провести мікроскопію готових препаратів із основними формами

Бактерії.

Пояснення до роботи

1.1 Обладнання навчальної мікробіологічної лабораторії.

Приміщення навчальної мікробіологічної лабораторії має складатися з навчальної, технічної кімнат та кімнати викладача.

У навчальній кімнаті має бути наступний інвентар: лабораторні столи, столи для мікроскопування, стіл для викладача, термостати, табурети, полиця з титрованими розчинами, ваги, класна дошка, стіл для посуду, раковина.

Для навчальних занять можна використовувати звичайний лабораторний стіл.

Стіл для мікроскопування необхідно встановлювати перед вікном; його висота має бути близько 80 см, ширина – близько 40 см. Для більшої стійкості стіл для мікроскопування влаштовують на кронштейнах.

Термостати. Мікроби необхідно вирощувати за таких умов, щоб температура навколишнього повітря піддавалася, можливо, меншим коливанням. Для цього застосовують термостати, що є шафами, в яких підтримується. постійна температура.

Існують повітряні та водяні термостати.

Повітряні термостати обігріваються теплим повітрям, яке нагрівається, як правило, електричним струмом.

У водяних термостатах між подвійними стінками знаходиться вода, що нагрівається електричним струмом, газом або іншими джерелами тепла. Коливання температури у цих термостатах менше, ніж у повітряних.

У лабораторії має бути не менше трьох термостатів: температура одного 30С, другого 37С і третього 43С. Мікробів, що добре розвиваються при 20˚С, можна вирощувати при кімнатній температурі.

Постійна температура у термостатах підтримується спеціальними пристроями – терморегуляторами. У термостаті з точним терморегулятором коливання температури не повинні перевищувати 2С.

Автоклав або стерилізатор.Автоклав є металевим циліндром з подвійними стінками і масивною кришкою, яка закривається гвинтовими затискачами.

На циліндр одягається металевий кожух. Автоклав забезпечений паровідвідною трубкою, манометром, запобіжним клапаном та водомірним склом. У ньому стерилізують живильні середовища, різні рідини та посуд.

Перед стерилізацією в автоклав через вирву водомірного скла наливають дистильовану або кип'ячену воду(при вживанні сирої води швидко утворюється накип) до межі, вказаної на кожусі автоклава. Після цього автоклав завантажують матеріалом, що підлягає стерилізації (останній необхідно зверху закривати папером), міцно загвинчують кришку, відкривають кран паровідвідної трубки і починають підігрівати.

Нагрівання здійснюється електрикою, парою (у цьому випадку воду в автоклав не наливають) або кількома газовими пальниками. У міру нагрівання з автоклава починає виходити спочатку повітря, а потім пара, яка надходить в автоклав через отвори у верхній частині циліндра. Коли пара почне виходити безперервним струменем, його випускають ще 2-3 хвилини для витіснення повітря з автоклаву, а потім закривають кран. Внаслідок цього припиняється вихід пари і поступово в автоклаві починає підвищуватись тиск (підйом стрілки манометра).

Після встановлення необхідного тиску рівень нагрівання автоклава зменшують так, щоб стрілка манометра залишалася на одному рівні протягом певного часу. Початок стерилізації вважається з досягнення стрілкою належного тиску.

Показання манометра відповідають певній температурі пари.

Показання манометра в атм Температура пари в ˚С

0,5 112,0

1,0 121,4

1,5 128,8

2,0 135,1

Після закінчення стерилізації нагрівання припиняють і дають стрілці манометра впасти до нуля. Тільки після цього відкривають кран паровідвідної трубки, випускають пару і впускають повітря, потім відкручують кришку, піднімають її і, давши в такому положенні охолонути автоклаву, виймають простерилізований матеріал.

Посуд та інвентар.

Чашки Петрі служать для посіву культур. Вживають чашки діаметром 10 см (висота 1,5 см). Скло має бути тонким, прозорим, без бульбашок повітря.

Піпетки. При бактеріологічній роботі використовують піпетки ємністю 1-5 та 10 мл. Найчастіше застосовують піпетки ємністю 1 мл, довжиною близько 28 см (без розширення).

Пробірки. Для розливання води по 10 мл застосовують пробірки розміром 18 х 2,0 см; використовують також пробірки розміром 18 х 1,5 см. Для живильних середовищ використовують пробірки розміром 15 х 1,8 см.

Голки та петлі. Для взяття досліджуваного матеріалу та для посівів користуються голками та петлями.

Для миття лабораторного посуду необхіднийстіл з ванною для миття.

При роботі з мікроскопом використовуютьпредметні та покривніскло . Скло повинно бути безбарвним з рівною поверхнею, без бульбашок повітря. Для спеціальних досліджень застосовуютьпредметне скло з лунками.

1.2 Оснащення та організація роботи виробничої

Мікробіологічної (бактеріологічної) лабораторії.

Бактеріологічне дослідження продовольчої сировини та продуктів з неї проводять у спеціальній лабораторії, що має дозвіл на роботу з мікроорганізмами ІІІ-ІV груп патогенності. Мікробіологічна (бактеріологічна) лабораторія (або бакотділ у складі виробничої лабораторії м'ясопереробного підприємства) призначена для санітарно-бактеріологічного контролю сировини, готової продукції, допоміжних матеріалів, санітарно-гігієнічного стану технологічного обладнання, інвентарю, тари, одягу та рук персоналу.

Приміщення лабораторії.Загальне розміщення лабораторії та її інфраструктура повинні відповідати вимогам ГОСТ Р 51446-99 (ISO 7218-96). У лабораторії передбачаються такі окремі приміщення чи ізольовані робочі зони:

для прийому, зберігання, підготовки та обробки проб;

для проведення первинного посіву, пересівання, приготування розведень та інших робіт в асептичних умовах;

для приготування, стерилізації, розливу та зберігання поживних середовищ, підготовки лабораторного посуду та обладнання;

для знезараження та очищення обладнання, відпрацьованих поживних середовищ та контамінованих мікрофлорою матеріалів.

Термостати, холодильники, морозильники можуть бути розміщені в окремих кімнатах.

Приміщення необхідно розташовувати так, щоб забезпечити їх захист від впливу зовнішніх факторів (підвищена температура, вологість, запиленість, шум, вібрація), організувати потоковість проходження чистих та заражених матеріалів.

М'ясо може бути обсіменене патогенною мікрофлорою, що становить серйозну небезпеку для здоров'я людей, і приміщення лабораторії мають бути ізольовані від інших відділів. Якщо немає можливості організувати окрему кімнату, допускається у спільному приміщеннівстановити стіл щодо первинного посіву проб. Доцільно обладнати засклений бокс із передбоксником для забезпечення асептичних умов роботи.

Лабораторні кімнати повинні бути світлими (освітленість поверхні столів у межах 500 лк) і просторими – для кожного аналітика рекомендована площа робочого місця близько 20 м. Стіни, стеля та підлога повинні бути гладкими, легкоочисні, стійкими до дії детергентів та дезінфікуючих речовин. Для зручності очищення та дезінфекції поверхню лабораторного інвентарю та меблів покривають гладким непроникним матеріалом, наприклад пластиком, а робоче місце – дзеркальним столом.

Для бактеріологічного аналізу харчових продуктів, зокрема ковбасних виробів та копченостей, необхідні 1-2 бокси з передбоксниками. Бокси є ізольовані, захищені від пилу засклені кімнати; максимально допустима кількість частинок розміром понад 0,5 мкм за 1м не повинна перевищувати 4000.

У приміщеннях лабораторії регулярно проводять прибирання та дезінфекцію, якість яких періодично контролюють мікробіологічним методом.

У кожному приміщенні повинні бути холодне та гаряче водопостачання, сулія з дезінфікуючим розчином для миття рук.

1.3 Правила роботи у мікробіологічній

лабораторії

Безпосередній контакт із мікроорганізмами та необхідність дотримання стерильних умов при проведенні всіх операцій потребують знання та неухильного дотримання наступних правил:

працювати у халатах;

підтримувати чистоту та порядок на робочому місці;

не торкатися пальцями мікробних нальотів та конденсаційної води в пробірках та чашках із посівами;

не прати мікробних нальотів з предметного та покривного скла та інших об'єктів серветками, фільтрувальним папером, дезінфікувати їх, поміщаючи в спирт або розчин карболової кислоти;

у процесі роботи та після проведення посівів знищувати залишки мікробних нальотів на бактеріологічних голках та петлях прожарюванням в полум'ї спиртування або газового пальника;

знешкоджувати використані забруднені матеріали та відпрацьовані культури мікробів стерилізацією в автоклаві (цю роботу виконують співробітники лабораторії);

не тримати спиртування близько до обличчя, запалювати спиртування тільки сірником;

прибрати та обробити робоче місце після закінчення роботи дезінфікуючим розчином під контролем лаборанта; помістити культури мікроорганізмів, необхідні для подальшої роботи, у холодильник або сейф, який закривають та пломбують; поставити в термостат засіяні мікрофлорою пробірки та чашки Петрі;

мити ретельно руки після закінчення роботи, не приймати їжу в лабораторії.

1.4 Пристрій оптичного мікроскопа та догляд за ним.

Мікроскоп – складний оптичний прилад, що збільшує предмет у 1000 – 1500 разів. Сучасний мікроскоп складається з двох основних частин – механічної та оптичної.

Механічна частина складається зі штатива, в якому розрізняють ніжку, основу, тубусодержатель, і предметного столика, що прикріплюється до основи штатива. Тубусоутримувач піднімається та опускається за допомогою макрометричного та мікрометричного гвинтів, призначених для грубого та точного фокусування об'єкта.

Оптична частина мікроскопа складається з освітлювального та спостережливого апаратів.

Освітлювальний апарат розташований під предметним столиком і складається з дзеркала, конденсора та ірис-діафрагми.

Дзеркало відображає світлові промені та спрямовує їх до конденсора.

Конденсор є системою лінз і служить посилення яскравості висвітлення аналізованого об'єкта.

До наглядового апарату відносять об'єктиви та окуляри.

Об'єктиви вкручуються в гнізда револьвера і складаються із системи лінз, укладених у металеву оправу. Передня або фронтальна лінза об'єктива є найменшою та єдиною, що дає збільшення. Інші лінзи в об'єктиві - корекційні.

Біологічні мікроскопи МБР-1 і МБІ-1 зазвичай мають три, чотири об'єктиви з цифровими позначеннями х8, х20, х40, х90, що показують власне збільшення цих об'єктів.

Окуляр вставляється у верхній кінець тубуса. Окуляр є системою двох плосковипуклих лінз, звернених опуклістю в бік об'єктива. Лінза, звернена до ока, називається очною, звернена до препарату – збирає. Окуляри вітчизняних мікроскопів позначаються цифрами, що показують їхнє власне збільшення: х5, х7, х10, х15.

Ступінь збільшення мікроскопа дорівнює добутку ступеня збільшення окуляра на рівень збільшення об'єктиву.

Правила догляду за мікроскопом:

Мікроскоп оберігають від попадання пилу, вологи та сонячних променів. Після роботи з ним його поміщають у футляр або накривають ковпаком із щільної тканини.

Об'єктиви та окуляри протирають замшею або фланеллю.

Тубус мікроскопа не залишають відкритим, тобто без окуляра, оскільки це призводить до накопичення пилу в тубусі та забруднення об'єктивів.

Мікроскоп складається із двох основних частин. Основою мікроскопа є штатив. До нього прикріплений тубус із укладеною в ньому оптичною частиною та предметний столик. Штатив складається з основи (або підковоподібної ніжки) та тубусоутримувача. Тубусодержатель з'єднується з основою шарніром, що дозволяє верхню частину мікроскопа встановлювати в похило положення для полегшення роботи. У тубус поміщають об'єктиви та окуляри. Об'єктиви вкручуються в нижню частину тубуса, що називається револьвером. Окуляри вільно вкладаються у верхню частину тубуса. Збільшення можна змінити шляхом застосування різних об'єктивів, які загвинчують у обертовий барабан револьвера.

Тубусоутримувач піднімається та опускається за допомогою макрометричного та мікрометричного гвинтів, призначених для грубого та точного фокусування об'єкта. Щоб препарат було ясно видно, тубус за допомогою механізмів грубого або мікрометричного руху необхідно пересувати у напрямку оптичної осі. Грубий рух має здійснюватись досить легко, але без мимовільного опускання тубуса. Для точної установки служить мікрометричний гвинт. Мікрометричний гвинт має складну конструкцію, є однією з частин мікроскопа, що найбільш легко ушкоджуються. Не можна повертати гвинт більш ніж на півоберта в той чи інший бік (після грубої установки мікроскопа). Предметний столик служить приміщення досліджуваного препарату.

Оптична частина складається з дзеркала, конденсора з діафрагмою, об'єктивів та окулярів. Дзеркало мікроскопа рухоме. При штучному світлі краще користуватися увігнутим дзеркалом, при розсіяному світлі – плоским. Дзеркало відображає світлові промені та спрямовує їх до конденсора. Конденсор застосовується для отримання сильнішого освітлення препарату. Діафрагма служить регулювання освітленості препарату. Діафрагма знаходиться між нижньою поверхнею конденсора та дзеркалом.

Об'єктиви – найважливіша частина мікроскопа, визначальна його оптичну потужність. Об'єктиви вкручуються в гнізда револьвера і складаються із системи лінз, укладених у металеву оправу. Передня або фронтальна лінза об'єктива є найменшою та єдиною, що дає збільшення. Інші лінзи в об'єктиві корекційні. Окуляри збільшують зображення, що дається об'єктивом, але не виявляють деталей досліджуваного препарату.

Об'єктиви, які при роботі потрібно занурювати в кедрова олія, називають імерсійними або занурювальними. Сухий об'єктив – це об'єктив, у якого між препаратом та лінзою знаходиться повітря. Кожен мікроскоп має сухі та іммерсійні об'єктиви. Об'єктиви із власним збільшенням 8 та 40 є сухими, об'єктив із власним збільшенням 90 – імерсійний.

Правила роботи з мікроскопом МБР-1

1. Мікроскоп зберігають у шафі для захисту від пилу, вологи та світла. Переносять мікроскоп правою рукою, тримаючись за ручку штатива, підтримують лівою знизу.
2. Приступаючи до роботи з мікроскопом окуляр, об'єктив та дзеркало протріть серветкою.
3. Встановіть мікроскоп штативом до себе предметним столиком від себе. Стосовно сидячого мікроскоп повинен бути зрушений ближче до лівого плеча. Праворуч від мікроскопа мають альбом, простий і кольорові олівці, гумка.
4. Поставте об'єктив малого збільшення в робоче положення. Для цього повертайте револьвер доти, доки потрібний об'єктивне займе серединне становище (встане над отвором столика). Коли об'єктив займає серединне положення, в револьвері спрацьовує спеціальний пристрій - клямка, при цьому чується легке клацання і револьвер фіксується. Запам'ятайте, що вивчення будь-якого об'єкта починається із малого збільшення.
5. Підніміть за допомогою макрометричного гвинта об'єктив над столиком приблизно на 1 см. Відкрийте діафрагму, підніміть конденсор до рівня предметного столика.
6. Дивлячись лівим оком в окуляр, за допомогою дзеркала наведіть світло так, щоб все поле зору було яскраво і рівномірно освітлено.
7. Покладіть на предметний столик, підготовлений препарат покривним склом догори, щоб об'єкт знаходився в центрі отвору предметного столика. За допомогою макрометричного гвинта опустіть об'єктив над препаратом на 0,2 см.
8. Дивіться в окуляр, одночасно повільно повертайте кремальєру на себе і плавно піднімайте тубус доти (0,5 см), доки у полі зору не з'явиться зображення об'єкта; обережно обертаючи мікрометричний гвинт не більше ніж на ½ або ¾ повного обороту, досягайте чіткої видимості.
9. Переходячи до розгляду об'єкта за великого збільшення, необхідно центрувати препарат, тобто. помістити цікаву частину об'єкта в центр зору зору. Для цього пересувайте препарат за допомогою препаратів або руками, поки об'єкт не займе потрібного положення. Якщо об'єкт не буде центрований, то при великому збільшенні він залишиться поза увагою.
10. Переходячи з меншого на збільшення, поворотом револьвера поставте об'єктив більшого збільшення проти нижнього отвору тубуса. Дивіться в окуляр і, обережно обертаючи мікрометричний гвинт, досягайте чіткого зображення.
11. При замальовуванні препарату дивіться в окуляр лівим оком, а правим у альбом.
12. Після роботи з використанням мікроскопа за допомогою револьвера замініть об'єктив великого збільшення об'єктивом малого, зніміть зі столика препарат і поставте його на місце.
13. Приберіть у себе робочий стіл; препарати та методичні вказівки на стіл викладача.

1.5. Основні форми бактерій.

За формою бактерії прийнято ділити на кулясті (коки), паличкоподібні (клостридії, бацили) та звивисті (вібріони, спірили, спірохети).

Кокковидні форми за розташуванням коків поділяються на мікрококи – клітини, розташовані одиночно; диплококи - коки, з'єднані по два; тетракоки - коки, з'єднані по чотири; стрептококи - коки, розташовані у вигляді довгого або короткого ланцюжка; сарцини – коки, які у вигляді пакетів; стафілококи - безладне скупчення коків, частіше у вигляді грон винограду.

Паличкоподібні форми за розташуванням паличок поділяють на диплобактерії – палички, з'єднані попарно; стрептобактерії – палички, які у вигляді ланцюжка. Серед спороутворюючих розрізняють бацили та клостридії. У бацил діаметр спор не перевищує ширини вегетативної клітини, а у клостридій – суперечки більше ширини клітини, тому клітина набуває форми веретена, тенісної ракетки, барабанної палички.

Звивисті форми поділяють на вібріони, що мають форми коми, спірили, що мають кілька (до 5) завитків, і спірохети з великою кількістюдрібних завитків.

Порядок виконання

2. Мікроскопія готових препаратів із основними формами бактерій.

Техніка мікроскопування.

На предметний столик поміщають досліджуваний препарат та закріплюють клемами.

При роботі з імерсійним об'єктивом 90 на препарат наносять краплю імерсійної олії, а потім за допомогою макрометричного гвинта обережно опускають тубус з центрованим об'єктивом 90 так, щоб його фронтальна лінза поринула в краплю олії, а фокус був нижче за препарат. Потім, дивлячись в окуляр, тим же гвинтом дуже повільно піднімають тубус (на соті частини міліметра), поки не побачать зображення мікробів. Точну установку препарату у фокус об'єктиву виробляють за допомогою мікрометричного гвинта.

Примітка.

Перевагою імерсійної системи є те, що при зануренні об'єктива в масло, промені світла, що проходять через середовище скло-масло, майже не заломлюються, оскільки показник заломлення світла для цих середовищ майже однаковий. Внаслідок цього освітленість при мікроскопуванні з маслом максимальна.

Після закінчення роботи видаляють серветкою з м'якої тканини іммерсійне масло з фронтальної лінзи об'єктива 90, для більш повного видалення масла фронтальну лінзу протирають серветкою, змоченою сумішшю спирту та ефіру в пропорції 1:1, потім протирають об'єктив насухо. Мікроскоп поміщають для зберігання.

При мікроскопуванні звернути увагу на форму і розмір клітин мікроорганізму, що вивчається, на особливості будови клітин - наявність спор і капсул у бактерій, нирок - у дріжджів; у препараті плісняв – на різноманітність форм клітин: круглі, овальні, витягнуті, циліндричні, гіллясті.

Звіт за результатами мікроскопування.

Результати мікроскопування заносяться до таблиці (форма1).

Форма 1

Контрольні питання.

1. Яким обладнанням має бути оснащена мікробіологічна лабораторія, його призначення?
2. Основні правила роботи у мікробіологічній лабораторії.
3. Яким є пристрій оптичної системи біологічного мікроскопа?
4. Яких правил необхідно дотримуватись при користуванні та догляді за мікроскопом?
5. Які основні форми бактерій ви знаєте?

Лабораторна робота № 2.

Приготування мікробіологічних препаратів для вивчення живих мікроорганізмів («роздавлена ​​крапля» та «висяча крапля»). Приготування мазків із мікробних культур.

Будь-яка робота з приготування препаратів мікроорганізмів, так само як і пересівання мікроорганізмів, проводиться з дотриманням правил асептики.

Устаткування лабораторного столу.

p align="justify"> Для роботи з мікроорганізмами потрібне певне обладнання. На робочому лабораторному столі повинні бути спиртівка або газовий пальник, бактеріологічна петля, предметне та покривне скло, набір фарб, мікроскоп, серветка, кедрова олія, пінцет, кювета з містком, посудина з водою, пісочний годинник, олівець по склу, фільтрувальний папір.

Мета заняття.

Ознайомитись з методами дослідження бактерій на рухливість.

Матеріальне забезпечення.

Молоді бульйонні культури мікроорганізмів у пробірках для дослідження на рухливість, предметне та покривне скло, предметне скло з ямочкою, бактеріологічні петлі, пастерівські піпетки, мікроскопи, сірники, спиртові або газові пальники.

Викладач має продемонструвати техніку приготування незабарвлених препаратів мікроорганізмів, підготовку мікроскопа до роботи, регулювання освітленості поля зору, встановлення збільшувача, техніку мікроскопування препаратів.

Під час роботи студентів викладачеві слід постійно перевіряти освітленість поля зору у кожному мікроскопі, у необхідних випадках допомогти відрегулювати її та подивитися зображення знайдених об'єктів. Перегляду незабарвленого препарату слід приділити особливу увагу, оскільки студенти повинні бачити тут і форму клітин та їх рухливість.

Завдання.

1. Приготувати препарати «роздавлена ​​та висяча крапля» для визначення рухливості бактерій.
2. Приготувати мазок із мікробної культури.
3. Вивчити техніку мікроскопування та подивитися приготовлені препарати під мікроскопом.
4. Скласти звіт щодо результатів мікроскопування.
5. Записати зміст заняття у робочий зошит.

Порядок виконання

1. Дослідження рухливості мікробів у препаратах «роздавлена ​​та висяча крапля».

Розчавлена ​​крапля.

Якщо організми знаходяться в рідкому середовищі, крапля суспензії наноситься на знежирене скло за допомогою стерильної піпетки. (Піпетка після вживання відразу ж поміщається у фарфорову склянку з дезінфікуючим розчином. Класти брудну піпетку на робочий стіл неприпустимо!). Якщо ж культура вирощена на твердому поживному середовищі, то на скло попередньо наносять краплю води, а потім поміщають у неї клітини мікроорганізмів або досліджувану пробу тестованого продукту бактеріологічною петлею, прожареною в полум'ї пальника, і ретельно розмішують.

Краплю рідини накривають покривним склом. Щоб під ним не утворювалися бульбашки повітря, покривне скло спочатку ставлять на предметне скло одним ребром, а потім плавно опускають, притискаючи «роздавлюючу» краплю. Бажано уникати надлишку рідини, щоб суспензія мікроорганізмів не вичавлювалася з-під покривного скла. Якщо це сталося, зайву рідину видаляють за допомогою фільтрувального паперу. Використаний папір слід відразу ж помістити в розчин, що дезінфікує.

Для мікроскопування препарату «роздавлена ​​крапля» використовують лише об'єктиви із сухою системою, тобто без імерсії. Цей вид препарату дозволяє встановити форму клітин, їх розмір, спосіб спороутворення, а якщо клітини живі, то наявність або відсутність рухливості.

Перевага препарату – виходить тонкий шар рідини, де можна побачити живі організми.

Недолік швидко висихає, і рух припиняється, часто потрапляє повітря, що порушує мікроскопічну картину.

Для приготування препаратувисяча крапля на покривне скло наносять невелику краплю суспензії мікроорганізмів, перевертають його краплею вниз і поміщають на спеціальне скло з поглибленням (лункою) в центрі. Крапля повинна вільно висіти, не торкаючись країв та дна лунки. Якщо чекають багатоденні спостереження, краї лунки змащують вазеліном і крапля виявляється герметично укладеною у вологій камері. Препарат «висяча крапля» використовують для виявлення рухливості мікроорганізмів, вивчення способів розмноження, спостереження за проростанням спор.

Для приготовленняпрепарату-мазка досліджувану культуру мікроба обережно розподіляють рівномірним тонким шаром на предметному склі. При приготуванні культур, що виросли на щільних середовищах, надходять таким чином. На чисте предметне скло стерильною піпеткою чи бактеріологічною петлею наносять краплю стерильної водопровідної води чи фізіологічного розчину.

а) Береться пробірка з культурою, з якої потрібно приготувати мазок. Бактеріологічну петлю прожарюємо в полум'ї пальника, тримаючи її у вертикальному положенні.

б) Затиснувши пробку між мізинцем і долонею правої руки, виймаємо її з пробірки і тримаємо кінцем донизу, не допускаючи зіткнення з рукою тієї частини пробки, яка була в пробірці.

в) Відкритий кінець пробірки обпалюємо на полум'ї.

г) Вводимо в пробірку петлю (ще раз проведену через полум'я), охолоджуємо дотиком до стінки пробірки і набираємо невелику кількість матеріалу, злегка торкаючись культури і не дряпаючи середовище петлею.

д) Краї пробірки та кінець ватної пробки обпалюємо над полум'ям пальника.

е) Пробірку закриваємо ватною пробкою.

ж) Взятий матеріал емульгують у краплі, що є на предметному склі, і рівномірно тонким шаром петлею розподіляють по поверхні (1,5 х 2 см).

з) Петлю прожарюють та кладуть на місце.

Якщо культура вирощена в рідкому живильному середовищі, то стерильну петлю опускають у рідину, захоплюють краплю та розтирають на предметному склі.

3.Техніка мікроскопування.

Місцять мікроскоп на робочому столі від краю на 3-5 см тубусодержателем до себе.

Встановлюють хороше рівномірне освітлення поля зору мікроскопа, навіщо, дивлячись в окуляр, дзеркалом спрямовують промінь світла джерела в об'єктив. Конденсор має бути піднятий нагору, а діафрагма відкрита. Поле зору мікроскопа має бути добре та рівномірно освітлене у всіх точках.

На предметний столик поміщають досліджуваний препарат мазком або краплею нагору і закріплюють клемами.

Незабарвлені препарати мікроскопують з об'єктивами х8 і х40, опускаючи конденсор на 1-0,5 см до препарату, досягають найкращої видимості незабарвлених клітин.

При мікроскопуванні "живих" мікробів (незабарвлений препарат) відзначити рухливість.

4.Звіт за наслідками мікроскопування.

в) малюнок клітин під мікроскопом (зазначити наявність спор, капсул, нирок, рухливість).

5. Записати зміст заняття в робочий зошит.

Контрольні питання

1. Яка техніка приготування препаратів «роздавлена ​​та висяча крапля»?
2. Яка методика приготування мазка з культури бактерій, вирощених на щільному поживному середовищі?
3. Що дозволяє встановити препарат "роздавлена ​​крапля"?
4. Для яких досліджень використовують препарат «висяча крапля»?

Лабораторна робота №3.

Приготування фарбованих препаратів бактерій.

Ціль заняття.

Навчитися готувати та фарбувати бактеріальні препарати простим методом та за методом Грама.

Матеріальне забезпечення.

Набір готових розчинів фарб у флаконах, набір сухих фарб у флаконах або в пробірках з гумовими або корковими пробками: основний та кислий фуксин, генціанвіолет, метиленовий синій, сафранін, малахітова та діамантова зелень, суміш мікробів: культури грампозитивних бактерій (Bac sub. saprophyticus), грамнегативних мікробів (E. coli), вирощених на скошеному МПА, предметне скло, розчин водного фуксину (фуксин Пфейффера), бактеріологічні петлі, фільтрувальний папір, мікроскопи, спиртові або газові пальники.

Викладач має продемонструвати техніку приготування забарвлених препаратів мікроорганізмів, підготовку мікроскопа до роботи, регулювання освітленості поля зору, встановлення збільшувача, техніку мікроскопування препаратів.

Під час роботи студентів викладачеві слід постійно перевіряти освітленість поля зору у кожному мікроскопі, у необхідних випадках допомогти відрегулювати її та подивитися зображення знайдених об'єктів. При перегляді забарвленого препарату студент повинен бачити наявність спор та капсул у мікроорганізмів.

Завдання.

1. Приготувати мазок із зубного нальоту та пофарбувати простим методом.
2. На одному предметному склі приготувати мазок із суміші стафілокока та кишкової палички та пофарбувати за Грамом.
3. Переглянути з імерсійним об'єктивом пофарбовані мазки.
4. Записати зміст заняття у робочий зошит.

Відповісти на контрольні питання.

Пояснення до роботи

Для вивчення форми мікробної клітини та деяких її структур препарат (мазок) із матеріалу, що містить досліджуваний мікроб, фарбують.

Більшість мікробів швидко та добре забарвлюються розчинами анілінових барвників. за хімічним властивостямїх прийнято ділити на основні та кислі. У основних барвників хромофором (іон, що надає фарбування) є катіон, у кислих - аніон.

До основних барвників відносяться червоні - нейтральний червоний, основний фуксин, сафранін, тіонін, піронін, гематоксилін; сині – метиленовий синій; фіолетові – кристалічний фіолетовий, метиленовий фіолетовий; зелені – малахітовий зелений, метиленовий зелений. Основні барвники, зазвичай, легко зв'язуються з ядерними (кислими) компонентами клітин.

До кислих барвників відносяться червоні та рожеві - кислий фуксин, еозин; жовті – пікринова кислота, конго, флуоресцен; чорні – нігрозин. Кислі барвники інтенсивніше фарбують (основні) компоненти клітин.

Приготування робочих розчинів фарб.Перш ніж приготувати робочі розчини фарб, призначені для фарбування мікробів, часто заздалегідь із сухих фарб, призначені для фарбування мікробів, часто заздалегідь із сухих фарб готують насичені спиртові розчини. Для цього фарбу заливають 96%-ним спиртом у співвідношенні 1:10. При такому співвідношенні спирт насичується фарбою (нерозчинена частина фарб випаде в осад). З метою економії рекомендується брати на 100 см ? спирту метиленового синього 7,0, генціанвіолета 4,8, основного фуксину 8,1.

Для кращого насичення спиртові розчини поміщають термостат і витримують до повного розчинення фарб. З насичених спиртових розчинів у разі потреби готують водні робочі розчини.

Найчастіше вживають такі розчини барвників:

Карболовий розчин фуксину Цилю.До 100 мл 5% розчину кристалічної карболової кислоти додають 10 мл насиченого спиртового розчину фуксину основного. Насичений розчин фуксину одержують при змішуванні 8 г кристалів фуксину 10 мл спирту. Фарба має червоний колір.

Фуксін Пфейфферає карболовий розчин фуксину Циля, розведений у дистильованій воді 1:10. Готується безпосередньо перед використанням. Фарба має насичений рожевий колір.

Карболовий розчин генціанвіолету.До 10 мл насиченого спиртового розчину фарби додають 100 мл 2% водного розчину карболової кислоти. Насичений розчин одержують, розчиняючи 1г кристалічного генціанвіолету в 10 мл 96%-ного спирту. Фарба має синьо-фіолетовий колір.

Сафранін. Готують безпосередньо перед використанням, додаючи до 100 мл гарячої води 1г сафранину. Фарба має червоно-коричневий колір.

Метиленова синя (синька Леффлера).Готують, додаючи до 100 мл дистильованої води 30 мл насиченого спиртового розчину фарби і 1 мл 1% водного розчину КОН або NaOH. Розчин має темно-синій колір.

Малахітова зелень.1 г фарби розчиняють у 100 мл дистильованої води, фільтрують. Розчин має синьо-зелений колір.

Розчин Люголю. Беруть 1г кристалічного йоду та 2г йодистого калію на 300 мл дистильованої води. Спочатку у невеликій кількості води розчиняють йодистий калій, а потім додають кристали йоду. Після повного розчинення додають решту дистильованої води.

Складні способи фарбуваннязастосовують для детального вивчення структури клітини, і навіть для диференціації одних мікроорганізмів з інших. Складні методи фарбування ґрунтуються на особливостях фізико-хімічної будови клітини та її частин. Найбільше практичне знання має забарвлення за Грамом, що дозволяє диференціювати бактерії за хімічним складом та структурою клітинної стінки.

Метод був розроблений датським ученим Християном Грамом в 1885 р. При забарвленні методом Грама всі бактерії діляться на дві групи: грампозитивні і грамнегативні.

Порядок виконання

Методика фарбування за Грамом.

1.Метод простого забарвлення.При простому методіЗабарвлення використовується один який-небудь барвник, найчастіше фуксин Пфейффера або метиленовий синій.

На фіксований препарат поміщають піпеткою кілька крапель барвника так, щоб покрити всю поверхню мазка: фуксин Пфейффера на 1-2 хв, метиленовий синій на 3-5 хв. Потім фарбу змивають водою, а мазок просушують між листочками фільтрувального паперу або на повітрі.

2.Складні методи фарбуваннязастосовують з метою діагностики, виявлення відмінних структур мікробів у випадках, коли останні не фарбуються простим способом.

Для диференціації мікробних клітин, що різняться хімічним складомі структурою клітинних стінок, використовується складний метод забарвлення - забарвлення за Грамом.

За фарбуванням за Грамом всі бактерії діляться на дві групи: грампозитивні та грамнегативні.

У грампозитивних бактерій (Г+) товщина клітинної стінки становить 15-80 нм, складається з пептидоглікану (від 60-90%), розташованого в кілька шарів, білка (близько 1%) та ліпідів (близько 1%). Виявлено полімери особливого типу – тейхоєві кислоти, ковалентно пов'язані з пептидогліканом. Великий вміст пептидоглікану забезпечує при фарбуванні за Грамом освіту комплексу з генціановим фіолетовим і йодом, стійкого до спирту, внаслідок чого вони пофарбовані в синьо-фіолетовий колір.

Товщина клітинної стінки грамнегативних бактерій (Г-) 10-15 нм, але структура її значно складніша, ніж у грампозитивних бактерій. Основу її складають орієнтовані внутрішні ліпіди (10-20%), які з поверхнево розташованими полісахаридами утворюють ліпополісахаридний шар. На поверхні клітинної стінки мозаїчно розташовані білки та полісахариди. Пептидоглікан представлений одним шаром завтовшки всього 2-3 нм (близько 5-10%), лежить під ліпополісахаридним шаром і щільно прикриває протопласт. Через більший вміст ліпідів клітинна стінка грамнегативних бактерій при фарбуванні за Грамом утворює з генціановим фіолетовим та йодом комплекс, що руйнується при обробці спиртом, внаслідок чого клітини знебарвлюються.

Неоднакове відношення мікроорганізмів до забарвлення за Грамом пов'язане з відмінностями в структурі та хімічному складі клітинної стінки бактерій.

До грампозитивних мікроорганізмів належать коки, бацили (спороутворюючі палички), актиноміцети, мікобактерії, клостридіальні бактерії.

До грамнегативних мікроорганізмів належать: бактерії (неспороутворюючі палички), спірили, сальмонели, E coli, псевдомонади, азотбактер, вібріони.

Є грамваріабельні мікроорганізми, відношення яких до забарвлення за Грамом змінюється на певних етапах їх життєвого циклу. Так як здатність клітин забарвлюватися за Грамом залежить від їх віку, для фарбування за Грамом використовують клітини молодої культури, частіше однодобової. Для порівняння одночасно з об'єктом, що визначається, доцільно забарвлювати клітини мікроорганізмів, відношення яких до забарвлення за Грамом відомо (контроль).

Забарвлення за Грамом здійснюють наступним чином:

1. Готують на предметному склі три мазки культури мікроорганізмів: у центрі – мазок досліджуваної культури, ліворуч та праворуч – мазки контрольних мікроорганізмів.

Мазки повинні бути тонкими, щоб клітини були рівномірно розподілені по поверхні скла і не утворювали скупчень, тому що від товщини мазка можуть залежати результати фарбування. Висушують мазки на повітрі, фіксують над полум'ям пальника.

1. Фарбують мазки карболовим генціановим фіолетовим. На мазки наносять достатньо барвника, витримують 1-2 хв, барвник зливають і, не змиваючи водою, мазки обробляють розчином Люголя до почорніння (приблизно 1-2 хв).
2. Зливають розчин Люголя і обробляють препарат 0,5-1 хв (строго) 96%-ним етиловим спиртом шляхом занурення в склянку зі спиртом або шляхом нанесення спирту на мазки (від часу обробки мазка спиртом залежить результат всього фарбування: при недостатній обробці всі бактерії зберігають фарбування, при надмірній – знебарвлюються).
3. Препарат негайно промивають водою та фарбують його 1-2 хв водним фуксином. Зливають барвник, препарат промивають водою, висушують фільтрувальним папером.
4. Мікроскопують препарат із імерсійною системою. Грампозитивні бактерії забарвлюють у темно-фіолетовий колір, грамнегативні – у червоний або рожевий колір фуксину (колір додаткового барвника).

Експрес-метод визначення грам-типу мікроорганізмів (за Крегенсеном).

Метод заснований на руйнуванні клітин грамнегативних бактерій у лужному середовищі та визначенні вільної ДНК.

На предметне скло наносять краплю 3%-ного розчину КОН, в яку вносять бактеріальною петлею досліджувані бактерії (24-годинна культура зі скошеного агару) і добре перемішують петлею.

Через 5-10 с при пересуванні петлі по склу при позитивній реакції в результаті тестування грамнегативних бактерій утворюється слизовий слід довжиною 1-2 см. Якщо слиз не утворюється, реакція негативна, тоді тестується грампозитивна культура.

3. Звіт про результати мікроскопування.

а) система мікроскопування;

б) мікроскопована культура;

в) малюнок клітин під мікроскопом (зазначити наявність спор, капсул).

4. Записати зміст заняття у робочий зошит.

Контрольні питання

1. Які розчини барвників використовують за найпростішого методу забарвлення?
2. Опишіть методику фарбування бактерій за Грамом.
3. Чому бактерії по-різному сприймають забарвлення методом Грама?
4. Які бактерії відносяться до грампозитивних, а які до грамнегативних?

ЛАБОРАТОРНА РОБОТА №4

Поживні середовища та техніка їх приготування.

Ціль заняття.

Опанувати техніку приготування поживних середовищ.

Матеріальне забезпечення.

Сухі живильні середовища, середовища, готові до вживання, електроплитка, посуд для варіння середовищ, індикаторний папір, 20% їдкий натр, 20% соляна кислота, пробірки, піпетки, чашки Петрі.

Перед виконанням роботи студенти повторюють питання харчування мікроорганізмів, живильні середовища, класифікацію поживних середовищ, основні вимоги до живильних середовищ.

За виконання лабораторної роботи студенти готують живильне середовище.

Завдання.

1. Ознайомитись із поясненням до роботи.
2. Приготувати живильне середовище (за завданням викладача).
3. Записати зміст заняття у робочий зошит.

Відповісти на контрольні питання.

Пояснення до роботи

У бактеріологічних лабораторіях не можна уникнути поживних середовищ. Для визначення виду мікроорганізму, виявлення збудника інфекційної хвороби, тобто встановлення діагнозу захворювання, виробництва специфічних препаратів (вакцин, сироваток), для лікування та профілактики інфекційних хвороб, отримання антибіотиків, санітарно-мікробіологічних досліджень об'єктів зовнішнього середовища, бактеріологічного дослідження м'яса та м'яса продуктів вдаються до штучного вирощування мікроорганізмів на живильних середовищах.

У лабораторіях культивують мікроорганізми in vitro, тобто. у скляних пробірках, колбах чи інших судинах. Для культивування in vitro необхідні субстрати, які мікроорганізми використовують як поживні речовини.

За потребою у поживних речовинах усі мікроорганізми можна поділити на три групи:

перша група - невибагливі, що ростуть на простих середовищах (гнильні, більшість кокових та інших мікроорганізмів);

друга група - що вимагають для свого зростання додаткових поживних речовин: повноцінного білка (курячого або сироваткового), вітамінів, певного набору амінокислот, мікроелементів (туберкульозна, туляремійна палички, лептоспіри та ін.);

третя група – що не ростуть на штучних живильних середовищах, а здатні розмножуватися тільки всередині живих клітин (віруси, рикетсії).

До живильних середовищ висувають такі вимоги:

1. Вони повинні містити джерела азоту та вуглецю, неорганічні сполуки, мікроелементи, а також фактори росту, вітаміни, переважно групи В.

Як універсальне джерело азоту використовують пептони. Пептони – це продукти гідролізного розщеплення м'яса чи казеїну. У них містяться поліпептиди, амінокислоти та основні мінеральні речовини.

Як універсальне джерело вуглецю в поживні середовища додають вуглеводи (цукри) - глюкозу, лактозу, сахарозу, органічні кислоти - молочну, лимонну та ін., багатоатомні спирти- маніт, гліцерин, сорбіт та ін.

2. Поживні середовища повинні мати певну реакцію середовища. Так, для більшості кокових, гнильних та патогенних мікроорганізмів оптимум рН 7,0…7,4, а плісняві гриби, дріжджі, молочнокислі мікроорганізми краще розвиваються при рН 6,0.

3. Поживне середовище має бути стерильним, тобто. не містити мікроорганізмів.

4. Поживне середовище має бути вологим, оскільки харчування у мікроорганізмів здійснюється за законами дифузії та осмосу. Багато середовищ мають бути прозорими для того, щоб можна було розрізнити на них зростання мікроорганізмів і спостерігати за фізіологічними змінами, що відбуваються внаслідок їхньої життєдіяльності.

По консистенції живильні середовища бувають рідкі, напіврідкі та щільні. Для приготування щільних середовищ в рідкі середовища додають агар-агар 2...3% концентрації, для напіврідкої - агар-агар 0,2...0,3% концентрації.

За походженням розрізняють середовища природні та штучні.

Природні живильні середовищає продуктами тваринного походження (кров, сироватка крові, молоко, жовч…) або рослинного походження (овочі, фрукти, злакові), які використовують для культивування мікроорганізмів без спеціальної обробки з повним збереженням їх природних властивостей.

Штучні живильні середовищаготують із продуктів переробки рослин, м'яса, молока, печінки та ін., часто з додаванням до них вуглеводів, кухонної солі, фарб тощо.

Серед штучних середовищ виділяють синтетичні середовища, тобто. середовища з відомим хімічним складом. Штучні живильні середовища поділяються на прості, чи звичайні, і складні.

Прості поживні середовища служать культивування більшості мікроорганізмів. Білковою основою всіх середовищ є поживний бульйон. Зазвичай користуються двома способами приготування основного поживного бульйону: на м'ясній воді з додаванням готового пептону - м'ясопептонний бульйон, на переварах продуктів гідролізу вихідної сировини за допомогою ферментів (трипсину - бульйон Хоттінгера, пепсину - бульйон Мартена) або кислот, такі середовища багатше амінокислот.

Від азотистого складу м'ясопептонних середовищ та від ступеня розщеплення білка в м'ясних та інших гідролізатах залежить вміст у середовищі загального та амінного азоту.

Для гарного зростаннябільшості мікроорганізмів необхідно вміст 100 см бульйону щонайменше 250 … 300 мг загального азоту за наявності у цьому кількості амінного азоту (амінокислот) загалом близько 25…30%.

Найбільш поширеними простими поживними середовищами є м'ясо-пептонний бульйон (МПБ), м'ясо-пептонний агар (МПА), м'ясо-пептонний желатин (МПЗ).

М'ясопептонний агар (МПА) використовують для визначення загальної кількості мікроорганізмів.

Основою для всіх трьох середовищ є м'ясна вода, яку готують з фаршу яловичини, залитого водою та звареного протягом 1,5...2 годин, профільтрованого та простерилізованого протягом 20...30 хвилин при 120˚С.

М'ясо-пептонний бульйон.До 1л м'ясної води додають 1% пептону і 0,5% кухонної солі, підлужують 10% розчином NaOH до рН 7,4, фільтрують і стерилізують протягом 15 ... 20 хв при тиску 0,1 МПа.

М'ясо-пептонний агар.До м'ясо-пептонного бульйону додають дрібно подрібнений агар-агар (2...3%), нагрівають суміш до розплавлення агару, встановлюють рН до 7,2...7,6, фільтрують через ватно-марлевий фільтр, розливають по пробірках і колбам стерилізують протягом 20 ... 30 хв при 120?

При необхідності МПА розігрівають на водяній бані до розплавлення. Пробірки укладають у спеціальні штативи під кутом 10 і після застигання отримують так званий скошений агар, який використовують для посівів мікроорганізмів. Розплавлений м'ясо-пептонний агар розливають також у чашки Петрі.

Аналогічно готують м'ясо-пептонний желатин.

Порядок виконання

2. Приготування живильного середовища з готового сухого живильного середовища.

Сухі живильні середовища.Випускаються прості, елективні та диференційно-діагностичні сухі живильні середовища. Сухі живильні середовища є гігроскопічні порошки, що легко розчиняються у воді. Сухі живильні середовища випускаються в скляних банках з кришками, що щільно загвинчуються.

Такі середовища готують згідно з інструкцією, розчиняючи порошок у зазначеній кількості дистильованої води, фільтрують і стерилізують при температурі 120С протягом 20 хв.

Сухий живильний агарготують наступним чином: до розчиненого сухого агару (5 г агару на 100 мл) додають як фактори росту невелику кількість дріжджового екстракту, м'ясної води, фільтрують через ватно-марлевий фільтр, розливають у пробірки або флакони і стерилізують при 0,1 МПа протягом 20 хв.

3. Записати зміст заняття у робочий зошит.

Контрольні питання

1. Які основні вимоги до живильних середовищ?
2. Які найбільш уживані поживні середовища, призначені для культивування мікроорганізмів, їх призначення?
3. Які компоненти входять до складу простих поживних середовищ?

Список використаної літератури

1. Градова Н. Б. Лабораторний практикуміз загальної мікробіології - М.: ДеЛі принт, 2010.
2. Мармузова Л. В. Основи мікробіології, санітарії та гігієни в харчовій промисловості - М.: 2005.
3. Мудрецова-Вісс К. А. Мікробіологія, санітарія та гігієна - М.: ДЛ, 2010.

«Основи мікробіології, санітарії та гігієни».

МЕТОДИЧНІ ВКАЗІВКИ

до лабораторних робіт №№1-4

для учнів професії НУО

34.17 Оператор ковбасного виробництва.

__________________________________________________________________

Жукова Любов Анатоліївна, викладач спеціальних дисциплін ДАОУ СПО міста Москви ТК №28

Державний автономний освітній заклад

середнього професійної освітиміста Москви

Технологічний коледж №28

Адреса: Москва, вул. Верхні поля, 27

Здано до друку 07.02.2012.

Формат паперу 60х90/16

Тираж 16 екз.

Надруковано в друкарні:

Державний автономний освітній заклад

середньої професійної освіти міста Москви

Федеральне агентство з освіти

Державний освітній заклад

«Іркутський державний університет»

МАЛИЙ ПРАКТИКУМ З МІКРОБІОЛОГІЇ

Навчально-методичний посібник

Іркутськ 2009

УДК 579(076.5)

Друкується за рішенням редакційно-видавничої ради Іркутського державного університету

Жилкіна практикум з мікробіології: Навчальний метод. посібник для студ. вищ. навч. закладів за спеціальностями «Мікробіологія», «Біологія» та «Фізіологія».

6. Мікробна маса не повинна забруднювати руки, стіл та навколишні предмети. Мікробну, що пролилася, завись знешкоджують, використовуючи дезінфікуючі засоби.

7. Після закінчення роботи культури здають викладачеві, засіяні пробірки та чашки ставлять у термостат.

8. Бактеріологічні петлі, голки, пінцети та інші металеві предмети після зіткнення з мікроорганізмами пропалюють у полум'ї спиртівки та ставлять у спеціальний штатив.

9. Використані предметні та покривні скла, піпетки, шпателі тощо поміщають у 3–5%-ний розчин карболової кислоти або інші дезінфікуючі розчини.

10. Відпрацьовані культури в пробірках, чашках Петрі і т. д. знешкоджують за допомогою дезінфікуючих розчинів протягом доби, потім кип'ятять посуд і миють.

11. Слід суворо дотримуватись особистої гігієни – після закінчення роботи необхідно ретельно вимити руки з милом.

12. Необхідно дотримуватися техніки безпеки під час роботи з електроприладами та хімічними реактивами.

ПІДРУЧНИКИ ТА НАВЧАЛЬНІ ПОСІБНИКИ ДЛЯ СТУДЕНТІВ

ВИЩИХ НАВЧАЛЬНИХ ЗАКЛАДІВ

В. Н. КИСЛЕНКО

ПРАКТИКУМ

ПО ВЕТЕРИНАРНІЙ

МІКРОБІОЛОГІЇ

І ІМУНОЛОГІЇ

Допущено Міністерством сільського господарства РФ у

якості навчального посібникадля студентів вищих

навчальних закладів, які навчаються за фахом

«Ветеринарія»

МОСКВА «Колос» 2005

УДК 619: 579(075.8) ББК 48я73 К44

Редактор Т.С. Мояочаєва
Рецензенти: доктор ветеринарних наук, професор В. І. Плешакова(Інститут вієте

ринарної медицини Омського ДАУ); доктор ветеринарних наук, професор IT. І. Ба

ришників(Інститут ветеринарної медицини Алтайського ДАУ)

Кисленко В. М.

К44 Практикум з ветеринарної мікробіології та імунології. - М.: Колос, 2005. - 232 с. арк.: іл. - (Підручники та навч. посібники для студентів вищ. навч. закладів). ISBN 5-9532-0332-2

Практикум складається із двох розділів. Розділ « Загальна мікробіологія» містить відомості про правила роботи в бактеріологічній лабораторії, опис основних мікробіологічних, генетичних та імунологічних методів вивчення мікроорганізмів. У розділі «Збудники інфекційних хвороб» перераховано методи лабораторної діагностики, диференціації збудників та надано перелік застосовуваних біопрепаратів.

Наведено методичні вказівки щодо проведення практичних занять для викладачів.

Додаються комплекти тестів на електронному носії (CD-диску) за загальною та приватною мікробіологією, імунологією, а також за теоретичним курсом.

Для студентів вищих навчальних закладів за спеціальністю "Ветеринарія".

ВСТУП

Ветеринарні лабораторії – це установи державної ветеринарної служби, діяльність яких спрямована на забезпечення благополуччя у тваринництві, попередження та ліквідацію хвороб та загибелі тварин, а також на охорону населення від хвороб, загальних для тварин та людини. За призначенням ветеринарні лабораторії бувають районні, міжрайонні (зональні), обласні (крайові) та республіканські.

Основне завдання ветеринарних лабораторій – встановлення точного діагнозу хвороб сільськогосподарських тварин, включаючи птахів, хутрових звірів, риб та бджіл, а також проведення експертизи м'яса, молока та інших харчових продуктів тваринного та рослинного походження. У лабораторіях також виконують наукові роботи, здійснюють виробництво деяких біостимуляторів, антибіотиків та ін.

Матеріалом для лабораторних досліджень є кров, сеча, мокротиння, молоко, фекалії, вміст абсцесів (гній), отримані за життя тварини; шматочки паренхіматозних органів або інших тканин після їх загибелі, проби об'єктів довкілля (вода, повітря, грунт, корми, рослини, змив з предметів догляду). Матеріал у лабораторії досліджують бактеріологічними, серологічними, гістологічними, біохімічними, мікологічними та токсикологічними методами, для чого мають бути створені необхідні умови (спеціально відведені приміщення, обладнання, мікроклімат та ін.).

Лабораторія займає окрему будівлю, розташовану далеко від проїжджих доріг. У ній мають бути приймальне відділення, пато-логоанатомічний, бактеріологічний, серологічний, біохімічний та вірусологічний відділи, а також спеціальні приміщення для термостатів, миття посуду, автоклавний. У кімнаті для миття посуду знаходяться столи, раковини, гаряче та холодне водопостачання, газова або електрична плита, стелажі для вимитого посуду, витяжна шафа, емальовані ванни, тази та інші ємності, розчин кислоти у скляних посудинах для знезараження піпеток, предметних шибок та предметного скла. . Окреме приміщення відводять під бактеріологічну кухню (середово-рочна), де готують живильні середовища для культивування мікроорганізмів, готують посуд для стерилізації. Тут же в шафах зберігають стерильний посуд та добре упаковані хімічні речовини, компоненти живильних середовищ

Для виконання роботи в асептичних умовах обладнають спеціальні ізольовані приміщення. бокси(англ. box - коробка), що складаються з власне боксу та передбоксника. Використовують також настільні бокси, предмети та повітря у яких знезаражують лампами УФІ, та ламінарні шафи, де крім цього застосовують активне видалення повітря.

Лабораторних тварин (білих мишей, морських свинок, білих щурів, кроликів та ін.) розміщують у віварії.Як правило, у віварії містять також здорових баранів-донорів, кров яких використовують для реакції зв'язування комплементу (РСК) та приготування живильних середовищ. Заражених лабораторних тварин утримують в ізольованому приміщенні.

Крім того, у будівлі є кімнати для фахівців, обслуговуючого персоналу, кабінет завідувача, бібліотека, вагова, роздягальня, склад та ін.

Щоб підтримувати належну чистоту, підлогу в кімнатах покривають лінолеумом або кахельною плиткою. Стіни та стелі, як правило, гладкі (без карнизів та ліпних прикрас), із закругленими кутами, пофарбовані у світлі тони масляною фарбою. Стелі можна білити вапном. Бажано облицьовувати стіни пластиком або плиткою від підлоги до стелі.

У лабораторії повинні бути гаряча та холодна вода, каналізація, педальні відра для сміття, які щодня звільняють, миють та дезінфікують, рушники, мило та дезінфікуючий розчин. У кімнатах знаходиться тільки необхідне обладнання: столи, шафа для зберігання дрібної апаратури, фарб, реактивів, посуду, інструментів і т. п. Столи зазвичай встановлюють перед вікнами. Вони мають бути стійкими, зручними, висотою 80 см, із закраїнкою. Поверхню столів покривають пластиком чи лінолеумом, склом чи білою спеціальною фарбою. На столі розміщують мікроскоп, також необхідні предмети для бактеріологічної роботи.

Бактеріологічний метод дослідження, як правило, включає мікроскопію, виділення та вивчення властивостей чистої культури збудника хвороби та зараження лабораторних тварин (біологічну пробу). Результати бактеріологічного аналізу за підписом завідувача відділення або директора лабораторії повідомляють лише офіційним особам: ветеринарному лікарю, зооінженеру, керівнику підприємства.

Устаткування мікробіологічної лабораторії.

Для роботи у лабораторії необхідні наступні приладита апарати: біологічні імерсійні мікроскопи з додатковими пристосуваннями (освітлювач, фазово-контрастний пристрій, темнопольний конденсор та ін.), люмінесцентні мікроскопи, термостати, апаратура для стерилізації, рН-метри, апарати для

отримання дистильованої води (дистилятор), центрифуги, технічні та аналітичні ваги, апаратура для фільтрування (фільтр Зейтца та ін.), водяні лазні, холодильники, апарат для виготовлення ватно-марлевих пробок, набір інструментів (бактеріологічні петлі, шпателі, голки, пінцети та ін), лабораторний посуд (пробірки, колби, чашки Петрі, матраци, флакони, ампули, пастерівські та градуйовані піпетки) та ін.

У лабораторії виділено спеціальне місце для фарбування мікроскопічних препаратів, де знаходяться розчини спеціальних барвників, спирт, кислоти, фільтрувальний папір та інше. Для повсякденної роботи лабораторія повинна мати у своєму розпорядженні необхідні поживні середовища, хімічні реактиви, діагностичні препарати та інші лабораторні матеріали. У великих лабораторіях є термостатні кімнати для вирощування мікроорганізмів, постановки серологічних реакцій.

Для вирощування, зберігання культур, стерилізації лабораторного посуду та інших цілей призначена така апаратура:

1. 
   Термостат. Апарат, у якому підтримується незмінна температура. Оптимальна температура для розмноження багатьох мікроорганізмів становить 37”С. Термостати бувають повітряними та водяними.
2. 
   Мікроанаеростат. Апарат для вирощування мікроорганізмів у анаеробних умовах.
3. 
   Холодильники Використовують у мікробіологічних лабораторіях для зберігання культур мікроорганізмів, поживних середовищ, крові, сироваток, вакцин та інших біологічних препаратів при температурі близько 4 °С. Для зберігання препаратів нижче 0°С призначені низькотемпературні холодильники, у яких підтримується температура -20°С та нижче.
4. 
   Центрифуги. Застосовують для осадження мікроорганізмів, еритроцитів та інших клітин, поділу неоднорідних рідин (емульсії, суспензії). У лабораторіях використовують центрифуги із різними режимами роботи.
5. 
   Сушильно-стерилізаційна шафа (піч Пастера). Призначений для повітряної стерилізації лабораторного посуду та інших матеріалів.
6. 
   Стерилізатор паровий (автоклав). Призначений для стерилізації парою під тиском. У мікробіологічних лабораторіях використовують автоклави різних моделей (вертикальні, горизонтальні, стаціонарні, переносні).

Правила роботи у мікробіологічній лабораторії.

Мікробіолог має справу з чистими культурами мікроорганізмів, які є потомством однієї клітини. Оскільки в повітрі та на поверхні предметів у лабораторії (на столах, приладах, інструментах, а також на одязі, руках та ін.) завжди присутня безліч різноманітних мікроорганізмів, слід постійно дбати про збереження чистоти культур, що вивчаються. Тому при роботі в мікробіологічній лабораторії необхідно суворо дотримуватись певних правил, одне з яких - підтримання чистоти, включаючи щоденне гігієнічне прибирання всіх приміщень.

Для знищення мікроорганізмів у повітрі та на поверхнях існують різні способидезинфекції.

Повітря у лабораторії частково очищають провітрюванням. Вентиляція різко знижує чисельність мікроорганізмів у повітрі, особливо при значній різниці температур зовні та всередині приміщення. Тривалість провітрювання щонайменше 30...60 хв.

Більш ефективний і найбільш часто застосовуваний спосіб знезараження повітря - вплив ультрафіолетовим випромінюванням (УФІ), що має високу антимікробну дію і викликає загибель не тільки вегетативних клітин, але і спір мікроорганізмів. Через слабку проникаючу здатність ультрафіолетове випромінювання не проходить через звичайне скло і легко поглинається частинками пилу. Тому для стерилізації час опромінення становить від 30 хв до кількох годин, залежно від ступеня забрудненості повітря.

Як джерело УФІ використовують бактерицидні лампи (УФО). Випромінювачем в них є електрична дуга, що виникає в парах ртуті. низького тискуі що випускає лінійний спектр ультрафіолетової області, понад 80 % енергії якого припадає на довжину хвилі 2,5 нм.

Бактерицидна лампа є скляною трубкою, вмонтованою між двома електричними контактами і включається в мережу через дросель. Трубка виготовлена ​​із спеціального скла, що пропускає всі промені з довжиною хвилі 2,5 нм і затримує випромінювання із довжиною хвилі коротше 2 нм. Слід пам'ятати, що УФІ викликає гостре запалення рогівки очей з характерною сльозотечею та світлобоязнью невдовзі після опромінення. Тому для того, щоб прямі або відбиті ультрафіолетові промені не впливали на очі, застосовують захисні окуляри. У невеликих приміщеннях при включеній бактерицидній лампі не можна перебувати.

Підлога, стіни та меблі в мікробіологічній лабораторії протирають розчинами різних речовин, що дезінфікують. Обробка пилососом видаляє з предметів пил та значну частину мікрофлори. Як дезінфікуючі розчини найчастіше використовують 0,5...3%-й водний розчин хлораміну. Особливо ретельно слід дезінфікувати поверхню столу, де проводиться робота з мікроорганізмами. Її необхідно протирати дезінфікуючим розчином перед початком роботи, так і після закінчення. На робочому столі неприпустимі зайві предмети. Всі реактиви та розчини повинні бути забезпечені етикетками та стояти на строго визначених місцях. У лабораторії не можна їсти, пити, палити. Працювати слід у халатах.

У лабораторних умовах мікроорганізми вирощують на щільних і рідких живильних середовищах, які розливають у пробірки, колби або чашки Петрі. Посуд та живильні середовища попередньо стерилізують. Внесення клітин мікроорганізмів у стерильне середовище називають посівом, або інокуляцією. Посів (або пересівання) мікроорганізмів вимагає чіткого дотримання певних правил, щоб убезпечити досліджувану культуру від забруднення сторонніми мікроорганізмами.

Посіви мікроорганізмів у стерильні середовища найкраще здійснювати в спеціальних приміщеннях – боксах. Бокс є невеликою ізольованою кімнатою, розділеною перегородкою на дві частини. В основне робоче приміщення боксу входять через тамбур, що має розсувні двері, що унеможливлює різке переміщення повітря і, отже, занесення ззовні сторонньої мікрофлори. Обладнання боксу включає стіл з поверхнею, що легко-миється, стілець, газову або спиртову пальники, бактерицидну лампу, укріплену в спеціальному штативі або змонтовану на стелі боксу. У боксі зручно мати підсобний стіл, де розмішають необхідні під час роботи предмети. Все обладнання боксу, його стіни, підлога і стеля періодично миють і протирають розчинами, що дезінфікують. Перед роботою бокс опромінюють бактерицидною лампою протягом 40...60 хв.

Після посіву пробірки або інші судини, в яких вирощують мікроорганізми, поміщають термостати, де за допомогою терморегуляторів підтримується постійна температура. Посуд із культурами мікроорганізмів, що підлягають утилізації, піддають автоклавуванню, щоб убити клітини, і тільки після цього миють. У посуд із щільними середовищами заливають розчин, що дезінфікує, який через добу видаляють, а посуд миють. Неакуратне поводження з культурами мікроорганізмів призводить до виникнення бактеріального аерозолю, що становить небезпеку здоров'ю співробітників.

Усі співробітники лабораторій, а також кафедр мікробіології, аспіранти, студенти, які приходять на заняття та працюють у науково-студентських гуртках, перш ніж приступити до роботи з заразним матеріалом (культури патогенних мікробів, трупи експериментально заражених тварин, виділення хворих тварин, кров та ін.) ) зобов'язані ознайомитися та суворо дотримуватись наступних правил роботи та техніки безпеки у ветеринарних бактеріологічних лабораторіях:

у приміщення лабораторії входять лише у спеціальному одязі: у халаті, білій шапочці чи косинці. Халат має бути наглухо застебнутий, волосся прибране під шапочку;

до лабораторії не можна проносити сторонні віші, продукти харчування. Портфелі та сумки складають у спеціально виділеному місці;

у приміщенні лабораторії категорично забороняється вживати їжу, пити та палити;

кожному працівнику (студенту) під певним номером виділяють робоче місце, мікроскоп та інше приладдя;

на робочому місці повинно бути обладнання тільки для виконання конкретного завдання. Зазвичай це набір фарб, колба з дистильованою водою, зливна чашка, банки з чистим та відпрацьованим склом, бактеріологічна петля, штатив, банка з дезінфікуючим розчином;

перед початком роботи необхідно перевірити наявність та справність приладів, посуду, газових пальників (спиртувань) та ін. Про помічені недоліки та несправності слід повідомити відповідальному, а на навчальних заняттях- викладачеві;

щоб уникнути вибуху не можна запалювати один спирт (або газовий пальник) від іншого; користуються лише сірниками;

не можна торкатися проводів та контактних частин електромережі металевими та іншими предметами;

студенти без відома викладача чи обслуговуючого персоналу не повинні включати електроприлади та апаратуру;

студенти приступають до виконання завдання лише з дозволу викладача; хід роботи повинен суворо відповідати методиці, що вивчається;

кожен: співробітник та студент повинен дотримуватися охайності в роботі, утримувати в чистоті робоче місце та обладнання;

матеріал, що використовується на навчальних заняттях, вважають особливо небезпечним;

при розпаковуванні матеріалу, надісланого для дослідження, необхідно бути обережними: банки зовні обтирають дезінфікуючим розчином і ставлять тільки на підноси або кювети;

при дослідженні матеріалу, що надійшов і при роботі з бактеріальними культурами дотримуються загальноприйняті в бактеріологічній практиці технічні прийоми, що виключають можливість інфікування працівника;

у процесі вивчення збудників інфекційних хвороб студенти повинні засвоїти особливості правил техніки безпеки під час роботи з конкретними збудниками;

розтин трупів експериментальних (лабораторних) тварин виробляють у спеціальному одязі на обладнаному столі за допомогою необхідних інструментів, використовуючи для цих цілей кювету, залиту воском (або парафіном). Інструменти після розтину на стіл класти забороняється: їх поміщають у склянку з дез-розчином або випалюють над полум'ям пальника;

під час роботи з рідким інфікованим матеріалом використовують гумові балони, з'єднані з піпеткою;

якщо в процесі роботи патологічний матеріал випадково потрапив на стіл, його негайно видаляють тампоном, змоченим розчином, що дезінфікує. При попаданні зараженого матеріалу на шкіру, кон'юнктиву, у ротову порожнину вживають екстрених заходів до знезараження;

після закінчення роботи патологічний матеріал, використані культури мікроорганізмів, інструменти та поверхня столу знезаражують;

наприкінці заняття бактеріальні культури та інший матеріал студенти повинні здати викладачеві, а робоче місце упорядкувати. Виносити із лабораторії пробірки з культурами, препарати (мазки) та інші предмети категорично забороняється;

патологічний матеріал та бактеріальні культури, необхідні для подальшої роботи, залишають на зберігання у закритому рефрижераторі або сейфі;

Перед виходом з лабораторії необхідно зняти халат, руки ретельно вимити і обробити йодованим спиртом. Виходити за межі лабораторії у халатах забороняється;

дотримання правил роботи та техніки безпеки на навчальних заняттях з мікробіології контролюють чергові. З технікою безпеки під час роботи на кафедрі мікробіології студенти знайомляться на першому занятті, про що розписуються у журналі.

Дотримуючись перелічених правил, співробітник у лабораторії забезпечує стерильність маніпуляцій і попереджає виникнення внутрішньо- та позалабораторного зараження.

Веде лабораторні записи. Зошит для лабораторних робіт є документом, що дозволяє контролювати правильність отриманих даних. До неї мають бути занесені відомості, що стосуються виконання цієї роботи. Запис необхідно вести акуратно, чітко та у визначеному порядку, наприклад: 1) назву досвіду, дата його постановки та закінчення; 2) об'єкт дослідження; 3) умови проведення досвіду; 4) основний принцип використовуваного методу аналізу; 5) результати досвіду.

Отримані результати докладно описують, чи цифровий матеріал зводять у таблиці, якщо необхідно, у графіки, діаграми, малюнки. Кожна лабораторна робота має закінчуватися власними спостереженнями та висновками, занесеними до робочого зошита.

У процесі роботи студенти опановують техніку та методи мікроскопування, знайомляться з морфологією представників різних груп мікроорганізмів, освоюють підхід до виділення чистих культур та їх ідентифікації, вивчають вплив умов та факторів довкілля на зростання та утворення різноманітних продуктів життєдіяльності мікроорганізмів та знайомляться з деякими методами генетичних досліджень. бактерій.

ЗАГАЛЬНА МІКРОБІОЛОГІЯ